UNIVERSIDAD NACIONAL "SAN LUIS GONZAGA, DE ICA 
FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA 
TOXICIDAD AGUDA Y EFECTO HEPATOPROTECTOR DEL 
EXTRACTO ETANÓLICO DE LOS TALLOS DE ENCELlA 
CANESCENS LAMARCK., EN RATAS EN UN MODELO DE 
INTOXICACIÓN CON PARACETAMOL 
TESIS 
PARA OPTAR El TITULO PROFESIONAL DE: 
QUÍMICO FARMACÉUTICO 
PRESENTADO POR: 
BACH. COCHACHI ALFARO, YASMINA 
BACH. FERNÁNDEZ LANDA, DEISSY LIZ 
ASESORES: 
DRA. Q.F. CHÁVEZ ORELLANA, HAYDEE 
DRA. Q.F. HUAYANCA GUTIÉRREZ, CARMEN 
ICA- PERÚ 
2015 
DEDICA TORtA 
Este trabajo fruto de perseverancia y 
sacrificio se lo dedico en primer lugar a 
Dios. 
Por haberme permitido llegar hasta este 
punto y haberme dado salud para lograr 
mis objetivos, además de su infinita 
bondad y amor. 
A mis padres, Adriano Y Gladys que 
hicieron todo en la vida para que yo 
pudiera lograr mis sueños, Por estar 
siempre presentes a pesar de la distancia 
en cada paso que doy , por sus consejos, 
sus valores, por la motivación constante 
que me ha permitido ser una persona de 
bien, pero más que nada, por su amor. 
A mis hermanos: Vladimir, Yordi y Edison 
Siendo ellos mí impulso para continuar día 
a día. 
A mis abuelos: que eilos siempre han 
confiado en mis capacidades y se han 
encargado de darme muchísimo ánimo. 
VAS MINA. 
DEDICA TORtA. 
Este trabajo dedico en primer lugar a Dios quién 
supo guiarme por el buen camino, darme fuerzas 
para seguir adelante, enseñándome a encarar las 
adversidades sin perder nunca la dignidad ni 
desfallecer en el intento. 
A mis padres, Humberto y Gregaria; quienes por 
ellos soy lo que soy, por su apoyo, consejos, 
comprensión, amor, ayuda en los momentos 
difíciles. Por valores y principios que me 
inculcaron, forjando en mí, carácter, empeño, 
perseverancia y coraje para conseguir mis 
objetivos. 
A mi hermano y una persona especial por estar 
siempre presentes, acompañándome para 
poderme realizar. 
DEISSVLÍZ 
\ 
l , ~ 
AGRADECIMIENTO. 
De manera muy especial, agradecemos 
a los asesores la Dra. Chávez Orellana, 
Haydee y Q.F Huayanca Gutiérrez, 
Carmen quienes nos han brindado su 
confianza y apoyo, así como también 
sus consejos, no solo como maestras 
sino como amigas. 
A los profesores quiénes siempre 
estuvieron disponible para cualquier 
consulta y siempre es un apoyo. 
Un agradecimiento muy especial a 
nuestras amigas Yanina, Fiorella, 
Cruzcaya y a nuestra familia de 
Asociación científica de Investigación 
Farmacéutica (ACIF) nuestro mayor 
reconocimiento y gratitud. 
D.LIZ Y VASMINA. 
IN DICE 
Página 
s·uMARY. .................................................................................................. 1 
RESUMEN................................................................................................. 3 
l. INTRODUCCIÓN. 
11. MARCO TEORICO. 
2.1. ANATOMíA·oa·HíGA·oo ............................................................ 10 
2.1.1. Componentes estructurales del hígado ................................... 11 
2.2. FUNCIONES DEL HÍGADO ....................................................... 16 
2.2.1. Metabolismo de proteínas ..................................................... 17 
2.2.2. Metabolismo de hidratos de carbono ................................... 18 
2.2.3. Metabolismo de Jos lípidos ..................................................... 19 
2.2.4. Detoxificación de fármacos y toxinas .................................... 19 
2.3. MARCADORES DE LESIÓN HEPÁTICA ...................................... 20 
2.3.1. Transaminasa hepáticas ........................................................... 20 
2.3.2. Niveles normales de transaminasas ...................................... 21 
2.3.3. Determinación de TGO/TGP en suero .................................... 21 
2.3.4. Elevación de TGO/TGP ............................................................. 22 
'\ ( 
2.3.5. Fosfatasa alcalina ...................................................................... 23 
2.3.fi. Proteínas totales......................................... . 24 
.............................. 
2.3.7. Albúmina.................................................................................... 25 
2.3.8. Bilirrubina 
.................................................................................. 25 
2.4. VALORES NORMALES DE LAS ENZIMAS HEPÁTICAS EN LAS 
RATAS........................................................................................ 26 
2.5. HEPATOTÓXICIDAD ......... ;....................................................... 26 
2.5.1. Mecanismo de daño hepático................................................ 27 
2.5.2. Agentes hepatotóxicos............................................................ .28 
2.5.3. Tetracloruro de carbono......................................................... 29 
2.5.4. Paracetamol............................................................................. 29 
2.5.4.1. Biotransformación del paracetamol...................................... 31 
2.5.4.2. Biotransformación de dosis terapéuticas ............................ 31 
2.5.4.3. Biotransformación de dosis toxicas ....................................... 33 
2.5.4.4. Mecanismo de hepatotoxicidad por paracetamol .............. 34 
2.5.4.5. Manifestaciones clínicas .......................................................... 37 
2.6. TOXICIDAD AGUDA.................................................................. 38 
2.7. PLANTAS MEDICINALES CON EFECTO HEPATOPROTECTOR .... 39 
2.7.1. Ence/ia canescens Lamarck ..................................................... 41 
2.7.2. Descripción botánica............................................................... 41 
2.7.3. Distribución geográfica........................................................... 42 
2.7.4. Uso en la medicina popular ..................................................... 42 
111. MATERIALES Y MÉTODOS. 
3.1. MATERIALES ................................................................................... 44 
3.1.1. Material biológico........................................................................ 44 
3.1.2. Material de vidrio ......................................................................... 44 
3.1.3. Reactivos y disolventes ................................................................ 44 
3.1.4. Medicamentos ............................................................................•. 44 
3.1.5. Equipos.......................................................................................... 44 
3.2. METODOLOGÍA ANALÍTICA........................................................... 45 
3.2.1. Estudio fitoquímico........................................................................ 45 
3.2.2. Recolección, selección y secado de la muestra en estudio ........ 45 
3.2.3. Clasificación taxonómica............................................................. 45 
3.2.4. Obtención del extracto etanólico ............................................... 45 
3.2.5. Screening fitoquímico................................................................. 46 
3.2.5.1. Obtención de fracciones........................................................... 46 
3.2.5.2. Detección de grupos funcionales y metabolitos secundarios .. 47 
3.3. EVALUACIÓN DE LA TOXICIDAD AGUDA............................... 52 
3.3.1. Método experimental .............................................................. 52 
3.4. EVALUACIÓN DEL EFECTO HEPATOPROTECTOR .................... 53 
3.4.1. Método experimental.............................................................. 53 
3.4.2. Ensayos bioquímicos................................................................. 54 
3.4.2.1. Determinación de alanina aminotransferasa .................... 54 
3.4.2.2. Determinación de aspartato aminotransferasa ................... 56 
3.4.2.3. Determinación de fosfatasa alcalina ...................................... 57 
3.4.2.4. Determinación de proteínas totales ....................................... 58 
3.4.2.5. Determinación de albúmina .................................................... 59 
3.4.2.6. Análisis histopatológico........................................................... 61 
3.5. Análisis estadístico................................................................... 61 
IV. RESULTADOS. 
4.1. ESTUDIO FITOQUÍMICO................................. ...... ......... ...... ......... .... 63 
4.2. Clasificación Taxonómica ................................................................ 63 
4.3. Screening Fitoquímico ..................................................................... 64 
4.4. TOXICIDAD AGUDA .......................................................................... 65 
4.4.1. Comportamiento del peso corporal ............................................. 65 
4.4.2. Síntomas clínicos ............................................................................ 66 
4.4.3. Examen anatomopatológicos macroscópicos .............................. 67 
4.5. EFETO HEPATOPROTECfOR ........................................................... 67 
V. DISCUSION ............................................................................................. 79 
CONCLUSIONES.......................................................................................... 83 
RECOMENDACIONES................................................................................ 85 
REFERENCIA BIBLIOGRÁFICAS................................................................. 87 
ANEXOS ....................................................................................................... 104 
ALAT: Alanina aminotransferasa. 
ALP: Fosfatasa alcalina. 
APAP: Paracetamol. 
ASAT: Aspartato aminotransferasa. 
2C: Grados Centígrados. 
cm: Centímetros. 
C max: Concentración máxima. 
CCL4: Tetracloruro de carbono. 
DLSO: Dosis letal media. 
ABREVIATURAS 
EES: Rendimiento de extracto etanólico seco. 
FeCI3: Tricloruro férrico. 
g: Gramos. 
GSH: Glutatión. 
GSSG: Glutatión disulfuro. 
GPX: Glutation peroxidasa. 
H20: Agua. 
H202: Peróxido de hidrogeno. 
Kg: Kilogramo. 
L: Litro. 
LDL: Lipoproteínas de baja densidad. 
M: Muestra. 
mg: Miligramos. 
Min: Minutos. 
ml: Mililitro. 
NACN: Acetilcisteina. 
NAPQI: N- acetil p-benzoquinoneimina. 
nm: Nanómetro. 
NASH: Esteatohepatitis no alcohólica. 
OMS: Organización mundial de la salud. 
OPS: Organización Panamericana de la Salud. 
Rf: Franja de referencia. 
R: Reactivo. 
RER: Retfculo endoplasmatico rugoso. 
REL: Retículo endoplasmatico liso. 
Sil: Silimarina. 
T max: Temperatura máxima. 
TNT: Trinitrotolueno. 
mm: Milímetro. 
Ul: Microlitro. 
UNALM: Universidad Nacional Agraria La Molina. 
VLDL: lipoproteínas de muy baja densidad. 
VC: Cloruro de vinilo. 
%: Porcentaje. 
SUMMARY 
1 
The species Encelia canescens Lamarck (ECL) is traditionally used for it~ properties 
as galactófora, analgesic and anti urinary retention. However there is no scientific 
evidence of acute toxicity and hepatoprotective effect, is why in this study the acute 
toxicity and hepatoprotective effect ofethanol extract of ECL were evall!ated. Acute 
toxicity was evaluatéd using dose limits taking into account the 3Rs principie. The 
hepatoprotective effect was determined at different doses (200, 400 mg 1 kg) of the 
extract, the liver damage induced with paracetamol (200 mg 1 kg) plus the 
hepatoprotective effect of the ethanol extract was compared ECL. with a 
commercial hepatoprotective drug (silymarin). The results of acute toxicity showed 
that the evaluated parameters remained normal having 100% survival. In the 
macroscopic studies were not in changes in the organs examined. Since this is an 
indicator that the LDSO of the extract is greater than 2000 mg 1 kg, and is classified 
as non-toxic as table Williams. Hepatoprotective effect in groups treated with the 
ethanol extract of ECL. transaminase levels show, phosphatase, albumin and the like 
to the control group total protein, being the most active extract 400 mg 1 kg the 
effect similar Silymarin 300 mg 1 Kg. Based on these Results suggests that the 
ethanol extract of ECL. Has hepatoprotective effect, possibly by the presence of 
flavonoids in synergism with other secondary metabolites found in Phytochemical 
Screening as triterpenes, amino acids, anthraquinones. 
Keyword: Acute toxicity, hepatoprotective, Encelia canescens Lamarck, 
Paracetamol. 
2 
RESÚMEN 
3 
La especie Encelia canescens Lamarck, (ECL), es utilizada tradicionalml:lnte por sus 
propiedades como galactófora, analgésica y contra la retención de orina. Sin 
embargo no hay evidencias científicas sobre su toxicidad aguda y efecto 
hepatoprotector, es por ello que en este estudio se evaluaron la toxicidad aguda y 
efecto hepatoprotector del extracto etanólico de ECL. la toxicidad -aguda se evaluó 
empleando dosis límite teniendo en cuenta el principio de las 3Rs. El efecto 
hepatoprotector fue determinado a diferentes dosis (200, 400 mg/Kg) del extracto, 
inducido el daño hepático con paracetamol (200 mg/Kg), además se comparó el 
efecto hepatoprotector del extracto etanólico de ECL. con un fármaco 
hepatoprotector comercial (Silimarina). Los resultados de la toxicidad aguda 
mostraron que los parámetros evaluados permanecieron normales teniendo la 
supervivencia de un 100%. En los estudios macroscópicos no hubo lugar a 
modificaciones en los órganos examinados. Siendo est9 un indicador de que la DL50 
del extracto es superior a 2000 mg/kg, y se clasifica como no toxico según la tabla 
de Williams. En el efecto hepatoprotector los grupos tratados con el extracto 
etanólico de ECL. muestran los niveles de transaminasas, fosfatasa, albúmina y 
proteínas totales simiiares al grupo control, siendo el extracto de mayor actividad el 
de 400 mg/Kg semejante al efecto de Silimarina a 300 mg/Kg. Tomando como base 
estos resultados se sugiere que el extracto etanólico de ECL. posee efecto 
hepatoprotector, posiblemente por la presencia de Flavonoides en sinergismo con 
otros metabolitos secundarios cjue se encontraron en el Screening Fitoquímico 
como: triterpenos, aminoácidos, antraquinonas. 
Palabra clave: Toxicidad aguda, hepatoprotector, Encelia canescens Lamarck, 
Paracetamol. 
4 
l. INTRODUCCIÓN 
S 
Las enfermedades hepáticas representan un problema de salud a nivel mundial con 
importantes repercusiones, debido a la cantidad de funciones que realiza el hígado. 
El hígado es un órgano vital en el cuerpo humano, es el principal responsable del 
metabolismo de los hidratos de carbono, lípidos, proteínas y desintoxicación de 
xenobióticos y drogas. Por lo tanto, el hígado se somete a lesión ~ebido a la 
exposición crónica de drogas, sustancias toxicas ambientales (humo d~ cigarrillo), 
enfermedades autoinmunes (ll, fármacos y otros xenobioticos (2l. Estas condiciones 
patológicas y las características metabólicas y de vascularización propias de este 
órgano lo hacen más vulnerable. 
Las enfermedades hepáticas tienen una importante prevalencia en Latinoamérica, 
de una manera similar·a lo que ocurre en el resto del mundo (3l. 
Existen más de 900 drogas que han implicado daño hepático y es la razón más 
frecuente para retirar un medicamento del mercado. Muchos elementos químicos 
causan daño subclínico, es decir, que no se manifiesta con alguna sintomatología y 
se presentan solo con resultados anormales de las enzimas hepáticas. La 
hepatotoxicidad es responsable de un 5% de todos los ingresos hospitalarios y un 
50% de todas las causas de insuficiencia hepática aguda (4J. 
El paracetamol, también conocido como acetaminofén es ampliamente utilizado 
para el alivio de la fiebre, dolores de cabeza y otros dolores (sJ. Estudios recientes 
indican que la sobredosis del paracetamol es la principal causa de falla hepática 
6 
aguda en adulto en estados unidos (GJ. El paracetamol está involucrado en el 50% de 
los casos de falla hepática aguda en adultos, y en niños 13% de los casos (7). 
El paracetamol se metaboliza principalmente en el hígado y no es tóxico en dosis 
adecuadas. Sin embargo, ya sea en sobredosis accidental o deliberada puede 
conducir hepatotoxicidad causada por el metabolito reactivo N-acetii-P-
aminobenzoquinonaimina (NAPQI), lo que provoca el estrés oxidativo celular (s,91 • En 
junio del 2009 la administración de alimentos y medicamentos FDA (101, mediante un 
comité asesor recomendó las nuevas restricciones que se deben de tener para 
proteger a las personas de los potenciales efectos tóxicos de paracetamol. Hasta el 
momento ningún tratamiento ha evitado con éxito la progresión de la enfermedad 
hepática. 
En las últimas décadas se ha demostrado la eficiencia terapéutica de muchas 
preparaciones elaboradas a base de plantas medicinales ¡u¡, muchos de estos 
poseen principios ·activos de fenoles y flavonoides, también contienen taninos y 
alcaloides en menor proporción y a estos componentes se les atribuyen efectos 
curativos sobre determinadas enfermedades (121• De ahí la importancia de realizar 
estudios preclínicos con el propósito de detectar posibles efectos tóxicos post 
administración. 
La validación científica de las plantas medicinales es una necesidad, no podemos 
limitar a la sabiduría popular la seguridad y eficacia de una planta, pues cada parte 
de ella tiene numerosas sustancias con actividad biológica, y algunos metabolitos 
7 
secundarios capaces de producir efectos tóxicos (Bl. La introducción de estas en la. 
terapéutica debe efectuarse sobre una base científica que valide tanto sus-acciones 
farmacológicas como su toxicidad (l4l. 
Para la realización del presente trabajo se plantearon los siguientes objetivos: 
OBJETIVO GENERAL. 
Evaluar la toxicidad aguda y efecto hepatoprotector del extracto etanólico de los 
tallos de Encelia canescens Lamarck., en ratas en un modelo de intoxicación con 
Paracetamol. 
OBJETIVOS ESPECÍFICOS. 
1. Determinar los metabolitos secundarios presentes en el extracto etanólico 
de los tallos de Ence/ia canescens Lamarck mediante Screening fitoquímico. 
2. Determinar la dosis letal media (DLs0). 
3. Determinar la concentración que presenta mayor efecto hepatoprotector. 
4. Comparar el efecto hepatoprotector del extracto etanólico de Encelia 
canescens Lamarck frente al medicamento Silimarina. 
5. Realizar estudio histopatológico. 
8 
11. MARCO TEÓRICO 
9 
2.1. ANATOMÍA DEL HÍGADO. 
El hígado es después de la piel, el órgano más grande del organismo humano. El 
hígado se ve por primera vez en el embrión en desarrollo, durante la cuarta 
semana de embarazo. A medida que el feto se desarrolla, el hígado se divide en 
dos secciones, llamadas lóbulos derecho e izquierdo. Con el tiempo el lóbulo 
derecho será seis veces más grande que el izquierdo, pesa entre 1500 y 1900 g., 
alrededor del 3% del peso corporal de un adulto está representado por el hígado, 
recibe entre el 25 y 28% del flujo sanguíneo y utiliza aproximadamente el 20% de 
oxigeno total que necesita una persona '15l. Anatómicamente, se localiza en el 
cuadrante superior derecho y parte izquierdo por debajo del diafragma en la 
cavidad abdominal. Se considera una glándula mixta ya que posee funciones 
endócrinas y exocrinas. Está cubierto por la cápsula de Glisson, que es una fina 
cápsula de tejido conectivo, a su vez rodeada en su mayoría por el peritoneo '16l. 
Esta irrigado por las arterias hepáticas derecha e izquierda del tronco celiaco en 
' 
un 15% y entre el 70 a 75% del riego proviene de la vena porta hepática con 
sangre procedente del tracto digestivo, páncreas y bazo, por lo tanto recibe los 
nutrientes absorbidos en el intestino (excepto lípidos que son transportados vía 
linfática), agentes tóxicos, fármacos, secreciones pancreáticas, productos de la 
degradación de las células sanguíneas del bazo. Por lo tanto las células hepáticas 
son las primeras en estar expuestos a una gran cantidad de compuestos tanto 
nutrientes como sustancias tóxicas '17l. 
10 
2.1.1. Componentes estructurales del hígado. 
El parénquima que está conformado por placas de hepatocitos, el estroma de 
tejido conectivo que continua con la cápsula de Glisson y sostiene la estructuras 
de las ramificaciones de la vena porta, las arterias hepáticas y lo~ conductos 
biliares así como los nervios y las venas centrales, los sinusoides hepáticos con 
espacios vasculares que recorren las placas de los hepatocitos y los espacios 
parasinusoidal de Diese que separa el endotelio de los sinusoides de los 
hepatocitos (lBl, por otra parte se encuentra los lobulillos clásicos los cuales son 
unidades con forma hexagonal por donde atraviesan las arterias y las venas· de 
las triadas portales que pasan por sinusoides hepáticos y termina en la vena 
centrolobulillar o en la vena hepática terminal. Los lobulillos portales son 
bloques triangulares de parénquima hepático de tres lobulillos clásicos que en 
su eje central poseen unos conductos biliares y constituyen la parte medular de 
los lobulillos hepáticos. 
Los acinos hepáticos representan la unidad hepática más pequeña están 
formadas por tres zonas adyacentes de los lobulillos· clásicos separados por los 
vasos sanguíneos de distribución que van de un espacio portal a otro; esta 
unidad correlaciona la irrigación, la histología del hígado y la actividad 
metabólica (191 • 
Las tres zonas adyacentes de los lobulillos comprenden: la zona 1 que 
representa el área del tejido hepático que rodea en forma inmediata al dúctulo 
11 
biliar y a las ramas terminales de la vena porta y las arterias hepáti~as, la zona 
11 comprende el parénquima más alejado de estas estructuras, la región que 
rodea a la vena central y la zona 111 formada por el tejido hepático ubicado en 
las dos zonas anteriores. 
La células kuppfer son macrófagos específicos del hígado po$een forma 
estrellada y un núcleo oval grande, globoso y un núcleo visible, Sl! citoplasma 
contiene una gran cantidad 'd~ lisosomas de tejido fagocitaria capaces de 
incorporar partículas grandes como eritrocitos y bacterias; también unen 
partículas pequeñas pero lo hacen a través de vesículas por pinocitosis. En estas 
células se expresa la enzima NDPH-oxidasa, la cual participa en el d.esarrollo de 
la lesión hepática inducidas por tóxicos. Tiene diversas funciones, la principal es 
de mantener las hemostasias hepáticas a diferentes niveles, y también a través 
de la liberación de citoquina tienen un papel muy relevante en los procesos 
inflamatorios del hígado. 
Las células estrelladas o células de Ita se localizan en los espacios de Diese 
entre las células parenquimatosas y las células endoteliales de los sinusoides, 
su función prinCipal es el almacenamiento de vitamina A, y también es 
responsable de la producción de matriz extracelular durante la fibrosis '20l. De 
manera normal las células estrelladas permanecen quiescentes pero pueden 
ser activadas por diversos factores que estimulan las lesiones hepáticas por lo 
que proliferan y generan matriz extracelular. 
12 
El desarrollo de fibrosis hepática esta mediado por citocinas e~pecíficas y 
especies reactivas de oxigeno (ROS) liberadas por los hepatocitos dañados, la 
células de kupffer y las células estrelladas activadas '21l. 
Las células del Hoyo (Pit), son células con actividad citotóxica de fqrma similar 
a los linfocitos granulares de sangre periférica y en función parecida en la célula 
natural killer (asesinas naturales ) que reconocen a las células blanco a través 
de receptores específicos uniéndose a ellas y realizando sus funciones 
antitumorales por exocitosis de gránulos que contienen perforinas y granzimas, 
inducen apoptosis mediada por receptores y la activación de otras células del 
sistema inmune por la liberación de otras citocinas '22l. 
Los hepatocitos conforman los estratos celulares de los lobulillos hepáticos, 
tienen forma poligonal y miden entre 20 y 30 um de diámetro y se disponen 
laminarmente en una o dos células de espesor de acuerdo a su localización 
dentro del lobulillo, constituyen aproximadamente el 80% de la población 
hepática y viven alrededor de 150 días. Algunos hepatocitos pueden tener dos 
núcleos, poseen un gran número de mitocondrias y peroxisomas, pequeños 
complejos de Golgi; en su citoplasma contienen el retículo endoplasmático 
rugoso (RER) y ribosomas libres donde se sintetizan las proteínas; además 
albergan inclusiones de glucógeno y depósitos. En el retículo endoplasmático 
liso (REL) se sintetizan los lípidos de las lipoproteínas y ahí mismo se degradan y 
conjugan toxinas, drogas y etanol; lo que propicia la hipertrofia de este 
organelo estimulando la síntesis de membrana y enzima del REL generando 
13 
tolerancia en los individuos que ingieren grandes cantidades de toxinas, 
drogas y etanol. Los hepatocitos poseen gran capacidad regenerativa ya que 
entran en mitosis cuando su población se ve afeqada por cirugía, enfermedad 
o toxicidad (23l. 
14 
t.IGAWlNTO CORONARIO 
DEl H!GADO 
lÓSU.LO 
HEPÁTICO 
DERECHO 
VESfCULA 
BILIAR 
CONDUCTO 
DEWfRStmG--
COLtDOCO--
LIGAMENTO FALCIFORME 
Dt!L.HiGADO 
liGAMENTO REDONDO DEL HfGADO 
VENA CAVA 
INFERIOR LIGAMENTO. 
OE lA VENA 
CAVA CAUDAL 
ARTERIA HEPÁTICA--
LÓBUlO H~PATII.:O IZQUIERDO-.....;:;:;: 
LIGAMH~TO REDONDo--.....;; 
LÓBUlO CUA 
VESÍCULA BILIAR-----~ 
FIGURA Nº 01. Anatomía del hígado. 
15 
IMPRESIÓN 
DUODEl~AL 
2.2. FUNCIONES DEL HÍGADO. 
El hígado ejecuta un gran número de funciones y entre las más importantes 
están el almacenamiento y biotransformación de las sustancias que recibe por 
medio del torrente circulatorio y el sistema portal (24l. 
Normalmente biotransforma y acumula sustancia!! útiles en el organismo tales 
como la glucosa, en forma de glucógeno, amino~cidos, grasas y vitamina A y 
vitamina 812 (25l. 
El hígado está muy propenso a sufrir daños por la exposición a tóxicos debido a 
que los dos sistemas circulatorios pueden llevar hasta al hígado sustancias 
tóxicas o que se vuelven tóxicas con las transformaciones que tienen lugar en 
este órgano, a este proceso se le llama bioactivación (26l. 
Algunas de las. reacciones que sufren los tóxicos en el hígado d~ hecho los 
convierten en sustancias menos tóxicas o no tóxicas y más fáciles de excretar, a 
este proceso se le llama detoxificación. Para realizar sus funciones, el hígado 
cuenta con una gran cantidad de enzimas con funciones oxidativas y re-ductivas, 
entre las cuales se encuentran el sistema del citocromo de la proteína 450 (P-
450), flavin-monooxigenasas, peroxidasas, hidroxilasas, esterasas y amilasas. 
Otras enzimas también presentes son las glucuroniltransferasas, las 
sulfotransferasas, metilasas, acetiltransferasas, tioltransferasas. Todas estas 
enzimas tienen gran importancia en las biotransformaciones de los tóxicos (26l. 
El hígado produce y regula la concentración de ciertas sustancias de la sangre. 
Las sustancias producidas o controladas en el hígado son las albúminas, el 
16 
fibrinógeno y la mayoría de las globulinas y proteíflaS de la coagulación. Cuando 
hay descontrol de estas sustancias, el individuo se ~ncuentra bajo en defensas y 
susceptible a problemas de coagulación. Ejemplo qe sustancias reguladas por el 
hígado son los azúcares y los aminoácidos. Cuando se retrasa una ingesta, el 
hígado utiliza su almacén de glucógeno para producir glucosa y de l;;1s proteínas 
de reserva para producir aminoácidos. El hígado tambi_én tiene una función 
exocrina, produce la bilis por medio de la cual se excretan al intestino un 
número considerable de metabolitos (26l. 
La capacidad funcional del hígado no puede medirse con porcentpjes; no hay 
. . . 
exámenes que nos permitan establecer cuál es el porcentaje de hígado sano. Se 
sabe que una persona sana puede tolerar resecciones de más de la mitad del 
hígado sin problemas. El hígado tiene la particularidad de regenerarse luego del 
daño causado por age'ltes externos o por una cirugía (27l. Mediante volumetría 
hepática (técnicas radiológicas para medir el volumen hepático) se ha 
Pr<?puesto que se puede resecar (sacar) hasta dejar el 26% del volumen del 
hígado residual antes de tener riesgo de insuficiencia hepática post-operatoria. 
Es así que habitualmente se acepta que 1/3 (33%) del volumen hepático es lo 
necesario para sobrevivir (27'28l. 
2.2.1. Metabolismo de proteínas. 
La albúmina es la proteína plasmática de mayor importancia, regula el volumen 
sanguíneo y la presión oncótica. Las globulinas A y B transportan sustancias y 
regulan la presión coloidosmótica. En el hígado se degradan aminoácidos y el 
17 
amoniaco que se forma como producto del desecho altamente tóxico a través 
del ciclo de la urea. Se transforman los aminoácidos no esenciales en 
esenciales; son sintetizadas las lipoproteínas de baja de densidac;l (LDL) que 
transportan el colesterol desde el hígado a los tejidos del organismo, las 
lipoproteínas de baja densidad (VLDL) que transportan los triglicéridos desde el 
hígado a los tejidos y las proteínas de fase aguda importantes durante la 
respuesta inflamatoria(29l. 
2.2.2. Metabolismo de los hidratos de carbono. 
En el hígado se lleva a cabo una parte importante del metabolismo de los 
hidratos de carbono, se inicia con la fosforilación de la glucosa a glucosa 6 
fosfato, este es el primer paso de diversas rutas metabólicas y dependiendo de 
las necesidades energéticas de la célula, la glucosa 6 fosfato puede entrar a 
glucólisis para obtener energía o ser almacenada en forma de glucógeno 
hepático (glucogénesis) y durante un periodo de ayuno este será utilizado como 
combustible para la liberación de glucosa dando paso a la glucogénesis evento 
mediado por las hormonas adrenalina y glucagón(30l. Este órgano también 
realiza otro proceso bioenergético llamado gluconeogénesis que consiste en la 
obtención de glucosa a partir de otros metabolitos no hidrocarbonados y esto 
ocurre cuando las reservas energéticas se han agotado durante un ayuno de 12 
horas o por ejercicio físico prolongado para mantener niveles 'lormales de 
glucosa en sangre. 
18 
2.2.3. Metabolismo de los lípidos. 
En el hígado se lleva a cabo la lipogénesis o biosíntesis de ácidos grasos que 
consiste en una serie de reacciones cíclicas para la construcción de una 
molécula de ácidos grasos a través de la adición de dos moléculas de carbono 
derivadas de acetil CoA a una cadena de ácido graso; por otra parte, también se 
realiza la S-oxidación de ácidos grasos a partir de los depósitos de triglicéridos 
del tejido adiposo para proporcionar energía durante el ejercicio o el ayuno 
prolongado. En la degradación de los ácidos grasos se elimina dos unidades de 
carbono de la molécula de un ácido graso produciendo acetil CoA, que puede 
ser oxidado a C02y H20 por el ciclo de Krebs (31l. 
2.2.4. Detoxificación de fármacos y toxinas. 
Las membranas que rodean las sinusoides están constituidas por una gran 
cantidad de fenestraciones o poros que permiten el paso directo de moléculas 
hacia los hepatocitos lo cual confiere a los hepatocitos esta capacidad de 
d~purar fármacos, toxinas y drogas. Muchas de las sustancias no pueden ser 
eliminadas del organismo de manera directa por vía renal por lo que tienen que 
sufrir algunos procesos para convertirse en sustancias más solubles y así ser 
desechados. Esos procesos consisten en dos fases: oxidación y conjugación. La 
oxidación se realiza en el REL o en las mitocondrias de los hepatocitos y 
consisten en una serie de reacciones llevadas a cabo por las enzimas del 
citocromo P450 que oxidan a esas sustancias y las inactivan. Lá conjugación se 
19 
realiza con el ácido glucurónico, la glicina, taurina o radicales sulfato. En 
estudios se ha revelado que el consumo prolongaqo de ciertos fármacos genera 
hipertrofia del REL y por consiguiente aumenta11 las enzimas encargadas de 
estos procesos (32l. 
2.3. MARCADORES DE LESIÓN HEPÁTICA. 
Muy frecuentemente en la práctica clínica se realizan diferentes estudios que 
reflejan el grado de funcionalidad del hígado. Según lo que se quiera conocer, 
se puede evaluar la excreción de compuestos a través de medición de 
bilirrubinas (total, directa e indirecta), la integridad hepatocelular 
(transaminasas) y síntesis de proteínas (albúmina) por mencionar algunos. La 
evaluación de enzimas es lo más utilizado, ya que generalmente se encuentran 
elevadas en presencia de lesión o enfermedad hepática (33'34l. 
2.3.1. Transaminasas hepáticas. 
Las transaminasas son unas enzimas, principalmente localizadas en el hígado. 
Para determinar las transaminasas es necesario un análisis de sangre. Es una 
prueba sencilla que lo único que requiere es una extracción de sangre del 
paciente en ayunas y que generalmente se extrae de una vena del antebrazo. 
Previamente a la extracción es necesario que el paciente, unos días antes, haga 
una dieta en la que no sobrecargue el hígado, no tomando alcohol, escasas 
proteínas y grasas, y también es importante no realizar esfuerzos físicos 
importantes (35l. 
20 
En el organismo las enzimas permiten, por ejemplo, transformar sustancias. 
Dentro del grupo de las transaminasas las más importantes, ya que flOS pueden 
indicar a través de un análisis de sangre que algo pasa en el organismo, son: 
- TGO o AST: Transaminasa glutámico oxalacética. Está presente en casi todos 
los órganos, dentro de las células, y cuando se encuentra en sangre en niveles 
muy elevados significa que hay destrucción celular. 
- TGP o ALT: Transaminasa glutámico pirúvica. Se localiza principalmente en el 
hígado y su misión es la fabricación de glucosa (35l. 
2.3.2. Niveles normales de transaminasas. 
- Los niveles normales de ASTen sangre son: 5-40 U/mi. 
-Los niveles normales de ALT son: 5-30 U/mi. 
Cuando realizamos un análisis de sangre la proporción que encontramos de AST 
en relación con ALT es: AST/ ALT: 1/3. 
Se utilizan en la clínica para la confirmación diagnóstica del infarto agudo de 
miocardio (junto con la determinación de otras sustancias) y para el estudio de 
enfermedades hepáticas o musculares (36' 37l. 
2.3.3. Determinación de AST / ALT en suero. 
La administración de un aminoácido con nitrógeno isotópico va seguida de la 
aparición de dicho nitrógeno en numerosos aminoácidos de las proteínas 
tisulares; es decir, el organismo utiliza el nitrógeno de un aminoácido para las 
síntesis de otros. Esta reacción general de traspaso de nitrógeno de uno a otro 
21 
aminoácido se denomina transaminación y en ella participan un aminoácido y 
un cetoácido 138l. 
' Las reacciones de transaminación más frecuentes son aquellas ~n las que 
participa alfa-cetoglutarato cuya aminación produce glutamato. Por 
consiguiente, casi todos los aminoácidos pueden ceder grupo amino al alfa-
cetoglutarato, a través de una reacción de transaminación para formar el 
cetoácido correspondiente y glutamato. La reacción es de la siguiente forma: 
COOH-CH-CH2COOH-C-CH2-CH2-COOH 
La reacción precedente corresponde a la catalizada por la Transaminasa 
Glutámico Pirúvica (TGP) siendo igual para la que cataliza la Transaminasa 
Glutámico Oxaloacetica (TGO), solamente cambiando el aminoácido por 
aspartato y el cetoácido por oxaloacetato, es por eso que se les llama también 
Alanino aminotransferasa (ALT) y Aspartato aminotranferasa (AST), 
respectivamente, por el aminoácido utilizado!38l. 
2.3.4. Elevación de ASTY ALT. 
AST y ALT son indicadores sensibles de daño hepático en diferentes tipos de 
enfermedades. Más debe ser enfatizado que tener niveles más altos que lo 
normal de estas enzimas no indica, necesariamente, una enfermedad hepática 
establecida. Ellas pueden indicar algún problema o no. La interpretación de 
los niveles altos de AST y ALT depende del cuadro clínico en general y así lo 
mejor es que esto sea determinado por médicos experimentados en 
hepatología. 139l Los nivrles de estas enzimas no miden la extensión del daño 
~ 
22 
en el hígado o muestran un pronóstico de la marcha futura. Así, los niveles de 
AST y ALT no pueden ser usados para determinar el grado de daño hepático o 
indicar el futuro. En pacientes con hepatitis A aguda, las AST y ALT son muy 
altos (algunas veces alcanzan millares de unidad~s), pero la mayoría de estos 
pacientes con la hepatitis A recupera completamente el hígado, np quedando 
ningún daño. 
En la hepatitis C solo es observada una pequeña elevación en las AST y ALT, 
siendo que algunos de estos pacientes pueden haber avanzado para una 
enfermedad crónica con fibrosis o cirrosis (361. 
2.3.5. Fosfatasa alcalina (FA). 
La FA está comprometida en el transporte de metabolitos a través de las 
membranas celulares. Se le encuentra en orden decreciente de abundancia en 
la placenta, mucosa ileal, riñón, hueso e hígado. Los valores dependen de la 
técnica de laboratorio y varían poco entre las edades de 25 a 60 años. 
Después de los 60 se incrementan algo en la mujer por la mayor tendencia a la 
pérdida ósea. La colestasis estimula la síntesis de la FA por los hepatocitos. Las 
sales biliares detergentes u otros agentes de superficie facilitan la liberación 
de la FA de las membranas. Elevaciones aisladas de la FA puede observarse en 
otras condiciones tales como enfermedad de Hodgkin, diabetes, 
hipertiroidismo, insuficiencia cardiaca y enfermedad inflamatoria intestinal. La 
elevación de FA de origen hepático mayor de 3 veces lo normal ocurre 
primariamente en pacientes con enfermedad colestásica intra o extrahepática 
23 
y enfermedades infiltrativas tales como neoplasias granulomatosas, 
amiloidosis o enfermedad de Gaucher. Elevaciones menores de 3 veces no es 
específica de colestasis y puede observarse en cualquier daño hepático 
debido a que hay una buena correlación entre el aumento de la FA de origen 
hepático y otras enzimas de origen canalicular como la GTP, la elevación 
paralela de ambas es un buen indicador del origen hepático de la alteración ya 
sea colestasis aguda o crónica o enfermedades infiltrativas, lo que amerita 
complementar el estudio con imágenes '40l. 
2.3.6. Proteínas totales. 
También conocidas como proteinemia o proteínas séricas, ~esignan la 
concentración de proteínas en el plasma sanguíneo. Y sus valores están entre 
65 y 85 gramos por litro. Las proteínas totales están representadas por la 
albúmina y las diferentes globulinas, incluyendo alfa-, bet¡:¡-y gamma 
globulinas. Hablamos de hipoproteinemia cuando la tasa de proteínas es 
anormalmente baja, esto se da particularmente en el caso de insuficiencia 
hepática, como la cirrosis, las enfermedades generadoras de mala absorción 
intestinal o enfermedades de los riñones que cursan con "fugas" de proteínas 
por la orina. En contraste, en la hiperproteinemia encontramos una dosis 
demasiado alta de proteínas en la sangre y puede ser debida a una 
deshidratación grave o indicar ciertas enfermedades como el mieloma. El 
estudio de las proteínas totales se realiza a través de una Electroforesis de 
proteínas o EPS '41l. 
24 
2.3.7. Albúmina. 
Es la proteína plasmática más abundante producida por los hepatocitos. La 
producción diaria depende de varios factores que incluyen los aminoácidos 
suministrados, la presión oncótica del plasma, los niveles de citoquinas 
inhibitorias (particularmente la IL-6) y el número de hepatocitos funcionales. 
Su vida media es larga entre 19 a 21 días. Por esta razón, la albúmina 
plasmática raramente disminuye en la hepatitis aguda, pero en la hepatitis 
crónica cae gradualmente con la progresión a cirrosis. Por tanto, la 
concentración de albúmina es un marcador de descompensación y pronóstico 
en cirrosis (411 • 
2.3.8. Bilirrubinas. 
La bilirrubina es formada por la descomposición de los glóbulos rojos (grupo 
hemo) en el sistema retículo endotelial. La bilirrubina no conjugada se 
trasporta del bazo al hígado ligada a albúmina, es insoluble en agua por lo 
tanto no es excretada por medio de la orina. La bilirrubina conjugada puede 
ser excretada en la orina. Dentro del hígado es conjugada é! bilirrubina 
glucorónido y posteriormente es secretada en la bilis y el intestino 
respectivamente. En el intestino la flora intestinal la degrada a urobilinógeno, 
el cuál cierta parte es reabsorbida y es excretada por el riñón a través de la 
orina o es excretada por el hígado a través del tracto gastrointestinal. El resto 
es eliminado por las heces y esto es lo que le da su color característico. 
Normalmente en el suero se encuentra en forma no conjugada reflejando el 
25 
balance entre la producción y la excreción hepatobiliar. la hiperbilirrubinemia 
es el resultado de un incremento de la bilirrubina en plasma. La bilirrubina 
total se altera por aumento de la hemólisis, alteraciones genéticas, anemia 
neonatal, alteraciones eritropoyéticas, presencja de drogas. La bilirrubina 
directa refleja colestasis hepática, alteraciones genéticas y ¡:¡Iteraciones 
hepáticas. 
La bilirrubina se convierte en azobilirrubina mediante el ácido sulfanílicodiazo 
midiéndose fotométricamente (42, 43l. 
2.4. VALORES NORMALES DE LAS ENZIMAS HEPÁTICAS EN LAS RATAS. 
Los valores normales están dados en animales en condiciones normales, libre 
de cualquier situación de estrés (44l. Los valores están expuestos en la Tabla Nº 
01. 
TABLA N°0l.Valores normales de transaminasas en ratas 
Especie Valores normales 
2.5. HEPATOTOXICIDAD. 
AST(U/L) 
' l 39-92 
·1 
.1 ¡ 
ALT(U/L). · 
. ~ ' 
. ' 
. ,, "' .. .'.•'-' 
17-50 
La hepatotoxicidad, también llamada enfermedad hepática tóxica inducida 
por drogas implica daño sea funcional o anatómico del hígado inducido por 
ingestión de compuestos químicos u orgánicos. El hígado está especialmente 
26 
expuesto a toxicidad por razón de su función en la biotransformación, 
metabolismo y eliminación de agentes potencialmente tóxicos. Ciertos 
productos medicinales, al tom¡me en dosis elevadas o por un largo periodo de 
tiempo causan daños celulares, aunque la hepatotoxicidad es por lo general 
independiente de la concentración del fármaco, es decir, algunas drogas 
pueden causar daño hepático aún en dosis terapéuticas. La hepatotoxicidad 
puede ser causada por elementos naturales, remedios caseros o industriales, 
entre otros. Todo producto causante de daño al hígado se conoce como 
hepatotoxina (45l. 
2.5.1. Mecanismo de daño hepático. 
Muchas drogas son retiradas del mercado debido a un descubrimiento tardío 
de hepatotoxicidad. Debido a su metabolismo peculiar y a su cercana relación 
con el tracto gastrointestinal, el hígado es tremendamente susceptible a las 
injurias tóxicas. Cerca de un 75% de la sangre que llega al hígado viene 
directamente de los órganos gastrointestinales y el bazo por medio de la vena 
porta, el cual trae drogas y xenobióticos de forma concentrada. Son varios los 
mecanismos responsables bien sea de la inducción del daño hepático o de 
empeorar un proceso dañino (41l. 
Muchos compuestos dañan a la mitocondria, un orgánulo intracelular que 
produce energía. Su disfunción libera una excesiva cantidad de oxidantes que, 
a su vez, causan daño a la célula hepática. La activación de algunas enzimas en 
el sistema citocromo P450, tales como el CYP2El también conllevan a estrés 
27 
oxidativo. Las lesiones a los hepatocitos y a la? células del con~ucto biliar 
producen acumulación de bilis dentro del hígadq. Ello promueve la aparición 
de daño adicional hepático '45l. 
Las células que no pertenecen al parénquima h¡:!pático, como la~ células de 
Kupffer, células almacenadoras de grasa o células de Ita y leucocitos pueden 
tener un papel en estos mecanism~s tóxicos '45 l. 
2.5.2. Agentes hepatotóxicos. 
Las sustancias hepatotóxicas son: 
-El tetracloruro de carbono (CCI4). 
- El cloruro de vinilo (VC). 
-Los solventes orgánicos: la dimetilformamida, trinitrotolueno (TNT). 
-Los metales pesados: como el Hg. 
- Hierro y otros metales de transición: tales como cobre, vanadio, níquel, entre 
otros '46l. 
Entre los medicamentos que producen hepatotoxicidad tenemos: metotrexato, 
isoniazida, paracetamol o acetaminofén (más de 8 pastillas de 500 mg en 7 
horas), aspirina en dosis elevadas, su antídoto N-acetil cisteína, fluconazol, 
tamoxifeno, glucocorticoides, bloqueantes de los canales de calcio, benceno, 
amiodorona, antivirales, ácido valpróico, amoxicilina + ácido clavulánico, 
pirazinamida '46¡; también las bebidas alcohólicas, ron, whisky, sake, vodka, etc. 
Hay muchos más productos, lo que sucede, es que es el hígado el encargado de 
metabolizar la gran mayoría de drogas que entran al organismo, p<;>r lo cual, el 
28 
grado de hepatotoxicidad, también va a depender de la cantidad ingerida, si es 
intoxicación leve, aguda, crónica. Otro factor para la hepatotoxicidad también 
es la edad, fisiopatología~, situaciones de estrés (47l. 
2.5.3. Tetracloruro de carbono (CCI4). 
Pertenece al grupo de los hidrocarburos halogenados, es poco soluble en agua 
y su descomposición térmica produce fosfógeno (CbCO), el cual es un tóxico 
respiratorio. El CCI4 es metabolizado principalmente por la isoforma del 
citocromo P2E1, generando el hexacloroetano (CI3CCCI3), el triclorometano 
(CI3CH) y el fosfógeno (COCb) entre otros productos (48l. 
La administración de CCI4 produce una disminución en la concentración de 
glutatión (GSH) debido a un incremento en su conversión a glutatión disulfuro 
(GSSG) durante el proceso de atrapamiento de los radicales CCI 3 y OOCCI3 
derivados de dicha hepatotoxina (49l. En consecuencia, este estado de estrés 
oxidativo conduce a un aumento incontrolable en la producción de radicales 
libres lo que conlleva a su vez aun exceso en la peroxidación de los lípidos de 
membrana. 
2.5.4. Paracetamol. 
El paracetamol (acetaminofén, n acetil-p-aminofenol, 4-hidroxiacetilida,o 
APAP) es un analgésico antipirético que se utiliza actualmente en la clínica en 
humanos(50'51'52l a dosis terapéutica 1,2 g/ día en hombres (s3¡ presenta una gran 
seguridad farmacológica y se considera sustituto seguro y de fácil adquisición 
que la aspirina, ya que no presenta efectos secundf!rios tales como ulceración o 
29 
hemorragia gastrointestinal(54' 55l, confiando en la seguridad farma~ológica del 
APAP, inicialmente no se llevaron estudios farmacológicos serios; sin embargo, 
cuando se encontró que el APAP presentaba el principal metabolismo de la 
acetanilida y de la fenacetina dos fármacos utilizados en la clínica como 
analgésicos, los interés sobre sus características y propiedades fisicoquímicas y 
farmacológicas aumentaron considerablemente. 
Uno de los hallazgos más importantes sobre la farmacología del APAP fue de 
Eder y Cols (1964) (56l, quienes reportaron estados necróticos hepáticos en 
gatos a lo que se administraron una dosis diaria de 25-50 mg/kg de 
paracetamol durante 26 semanas. Dos años después, en estudios de toxicidad 
aguda realizados en ratas Boyd y Bereczky descubrieron un daño hepático 
extensivo (57l. 
El primer caso reportado de hepatotoxicidad por paracetamol fue en el año 
1966, Inglaterra. La toxicidad por paracetamol afecta mayoritariamente a 
personas de mediana edad (42 años), más frecuentemente en mujeres (3:2). La 
sobredosis con paracetamol es la causa más frecuente de insuficiencia hepática 
aguda (40%), seguida de las reacciones idiosincráticas (12%), desplazando a las 
de origen viral (HVA y HVB). En un 20% se desconoce la etiología (58' 59l. 
La incidencia mundial de muerte por sobredosis de APAP (dosis mayor de 15 
gramos) aumentó dramáticamente durante las décadas pasadas; la necrosis 
hepática aguda, seguida de falla ranal fulminante (60' 61l. 
30 
2.5.4.1. Biotranformación del paracetamol. 
El principal órgano involucrado en el metabolismo del paracetamol es el 
hígado. 
En general, puede abordarse desde dos condiciones diferentes: 
• Biotranformación a dosis terapéutica 
• Biotranformación de sobredosis del paracetamol, o en estados de 
intoxicación 162'63l. 
2.5.4.2. Biotranformación de dosis terapéutica. 
El metabolismo de los xenobióticos como el paracetamol que presenta grupos 
fenólicos se realizan principalmente por mecanismos de conjugación con ácido 
glucurónico y sulfato. 
Las reacciones de conjugación con glucurónico son catalizadas por la familia de 
enzimas de la difosfato glucoronosiltransferasa (UDP), enzima que se encuentra 
unida a la membrana del retículo endoplasmatico. Esta familia de enzimas 
forman aglicones conjugados UDP- ácido glucurónico con los grupos hidroxilo 
de los compuestos fenólicos (ver figura Nº 02}. 
31 
Conjllg;;:do con 
G!ucorór.ido 
PAm..tETAMOL 
r~ p- ami!lllferllll;4- hi~o;:i;¡,z:mnililt!;AP."Ul 
FAS'Eil 
1 ~·~ 
HNCOCH;, HNCOtH;, tmCOC~ 
Ó ~ 1 '~( 
1 OHC¡¡ 1 OH 
OH 
3-Metoxi 
p:racetamo! 
OH 
3-l'.idroxi 
p¡¡racetamol 
~I/ 
Trar.sferasa w GSH 
h"fi'COC~ 
o 
H-atetll p-
:mino 
b:nzoquinona 
imini! 
~ FASEO 
f) ))\_5-SGH 
o 
conjL~,=cllo 
NAPQI-GSH 
FIGURA N!! 02. Biotransformatión del ParatetamDI. 
32 
Las reacciones de sulfatación, por otra parte son catalizadas por la familia de 
enzimas diméricas de las aril-sulfotranferasa, que utilizan al 3'-fosfoadenosin-
5'-fosfosulfano (PAPS) como donador del grupo sulfato, donando un éster 
sulfato fenólico, adenosin-5-monofosfato y fosfato inorgánico (44l. 
La tercera ruta más importante en el metabolismo del paracetamol es la 
oxidación a través del sistema microsomal de las oxidasas en función mixta del 
citocromo P450 (CYP450), específicamente por las isoformas 2El,lA2 y 
3A4(45,46l que biotrasformaron el APAP a los derivados oxidados 3-hidroxi-
APAP,3-metoxi-APAP y N-acetii-P-amino benzoquinonaimina (NAPQI)(63•64l. 
La eliminación de los productos del metabolismo de conjugación de dosis 
terapéutica del APAP se realiza a través de los riñones, como conjugados de 
glucorónido o sulfato y muy pequeña cantidades como conjugados de glutatión 
y NAPQI; ninguno de estos metabolitos resulta tóxico para el organismo (65l. Por 
lo anterior, solo del 10 al 20% del APAP se metaboliza por procesos oxidativos 
excretando los productos de esta biotrasformación (derivados 3-hidroxi o 3-
metoxi) como conjugados de GSH por la orina (62l. 
2.5.4.3. Biotranformación a dosis tóxicas. 
Mientras que el paracetamol normalmente es biotranformado por procesos de 
glucuronidación, sulfatación y oxidación a dosis terapéutica, cuando la dosis es 
excesiva, estas rutas se saturan y el APAP excedente se metaboliza por el 
sistema microsomal CYP450. 
33 
En condiciones fisiológicas, la detoxificación del metabolito NAPQI, formado 
por la oxidación del APAP, se realiza eficazmente por el glutatión 
reducido(GSH), a través de la formación de conj~gados 3-(GSH-S-L)-APAP'66'67l 
que son excretados por el riñón como conjugados de cisteína y ácido 
mercaptúrico '34,46l, sin embargo como consecuencia del uso crónico, de la 
sobredosis, o de enfermedades hepáticas , las reservas de GSH disponible para 
conjugación con NAPQI se agotan, ocasionando acumulación del NAPQI y con 
ellos, una necrosis hepática fulminante'68l. De esta forma el metabolismo del 
APAP relacionado con el CYP450 parece jugar un papel crítico en el daño 
hepático inducido por el APAP, reconociendo al NAPQI como el metabolito 
tóxico causante del daño. 
2.5.4.4. Mecanismo de hepatotoxicidad por el paracetamol. 
Las bases de la toxicidad por paracetamol están bien estudiadas. Al ingerir dosis 
grandes de la droga el citocromo P450 (CYP2El, CYP1A2 y CYP3A) genera 
cantidades de NAPQI capaces de agotar las reservas hepáticas de glutatión. 
Este metabolito ejerce su toxicidad al unirse de forma covalente a 
macromoléculas y produciendo radicales libres, desarrollando necrosis hepática 
en tan sólo 12 horas '69l. En mucha menor medida, el mismo proceso puede 
ocurrir en el riñón y contribuirá la nefrotoxicidad. ta toxicidad es mayor cuando 
se asocian inductores del citocromo P450 (etanol -CyP2E y CYP3A -; 
fenobarbital -CYP2B y CYP3A-, carbamacepina, fenitoína, rifampicina, 
zidovudina) o aquellos que compiten en la conjugación (dicumarol, morfina, 
34 
prednisona, salicilatos, estrógenos) incrementando la formación del metabolito 
tóxico. El consumo crónico de etanol, que también provoca lesión centro 
lobulillar, altera el metabolismo del paracetamol por dos mecanismos. Por un 
lado, agota las reservas de glutatión per se, disminuyendo la Cé1pacidad de 
detoxificación del NAPQI (70•71l. Además, como inductor del citoc;romo P450 
(CVP2E1 Y CVP1A2) incrementa la transcripción de este grupo enzimático, 
aumentando la proporción de la droga que es convertida en otro factor que 
predispone a la toxicidad por acetaminofén es el ayuno prolongado, situación 
frecuente en los alcohólicos crónicos, cuya fisiopatología se postula como 
multifactorial (nl. Además el paracetamol también es per oxidado por la mielo 
peroxidasa y la COX-1, produciendo también metabolitos hepatotóxicos y 
provocando daño hepático en pacientes con insuficiencia renal crónica y asma, 
en particular por la supuesta seguridad del paracetamol en estas enfermedades 
(73) 
La expresión fenotípica del-factor de necrosis tumoral está implicada como un 
factor de severidad en la toxicidad por paracetamol. 
El receptor constitutivo de androstanol (RCA) mostró ser otro modulador de 
esta toxicidad en un estudio con ratones y potencialmente en humanos. La 
pérdida de este receptor resulta en resistencia a la toxicidad por paracetamol 
con ausencia de la inducción de las enzimas que lo metabolizan. El uso 
concomitante de androstanol, que bloquea al receptor, también disminuye la 
toxicidad en ratones, no así en humanos. La identificación de un agonista 
35 
inverso del RCA humano se propone como ~n nuevo objetivo para las 
estrategias de hepatoprotección no relacionadas qJn la inmunidad. 
Este enfoque es parte del desarrollo de la fármaco-genética (l4l. (Ver figura Nº 
03). 
UNCOCH, 
9 
OH 
PAAACETAMOL 
f<l .. ac~til p- amln.ofencl; 4:- h1d~c:>!llac~~tmnilidll; AflAii' 
rl-~mm ~.ll.sf:l 
tUICOCH, 
1 Q o· + 
o 
~-~/~---
unión COU'alente a m21tromol&:uMa.s ~enar.!amuie OH y O. 
1 
MUERTE CElULAR 
( E.<trés mó!le.tilto 
1 
FIGURA N" 03, Mecanismo de hep¡¡totoxitidad del pEinlcetamoL 
36 
2.5.4.5. Manifestaciones clínicas. 
Si bien las manifestaciones tempranas de toxicidad por paracetamol son leves e 
inespecíficas (y no predicen la gravedad de la hepatotoxicidad), son 
importantes de reconocer tempranamente. 
Etapa 1 (primeras 24 h): Puede haber náuseas, vómitos, letargia, aunque puede 
ser completamente asintomático. 
Etapa 11 (24 a 72 h): Comienzan las evidencias de hepatotoxicidad en los 
exámenes de laboratorio, al mismo tiempo que los síntomas iniciales pueden 
cambiar por dolor en hipocondrio derecho, con hepatomegalia. Puede aparecer 
concomitantemente oliguria y pancreatitis. 
Etapa 111 (72 a 96 h): Se llega al máximo de elevación de transaminasas, 
llegando en ocasiones a exceder de 10.000 IU/ml. Clínicamente puede haber 
ictericia, encefalopatía y coagulopatía. El 25 a 50% de los afectados presenta 
concomitanteinente insuficiencia renal por necrosis tubular aguda. 
Etapa IV (4 días a 2 semanas): Los pacientes que sobreviven la etapa anterior 
entran a una etapa de recuperación cuya duración depende de la gravedad del 
compromiso inicial. Los cambios histológicos afectan preferentemente a la zona 
111 (centro lobulillar), que es la de mayor concentración de CYP2El. No hay 
casos reportados de daño hepático crónico por paracetamol !75' 76l. 
37 
2.6. TOXICIDAD AGUDA. 
En la actualidad, la toxicología alcanza enorme trf!scendencia social debido al 
importante número de sustancias químicas comercializadas y su posible 
impacto ~obre la salud pública y ambiental. Ello ha conducido al desarrollo de 
estrategias de evaluación de riesgos con fines normativos. 
La toxicidad aguda tiene por objeto determinar los efectos de una dosis única y 
muy elevada de una sustancia. Usualmente, el punto final del estudio es la 
muerte del animal y la toxicidad aguda se expresa por la dosis letal 50, que 
viene a representar más o menos la dosis de la sustancia que produce la 
muerte en el 50% de los animales. Un solo compuesto puede generar efectos 
tóxicos agudos y crónicos estos dependen de la dosis y duración a la exposición. 
La observación de los animales se lleva a cabo después de la administración de 
la sustancia y dura hasta 14 días, después de los cuales los animales son 
sacrificados y autopsiados. 
En España en 1997 el Comité para los productos medicinales (CPMP) definió la 
regla de las 3R como objeto para reducir el número de animales sacrificados 
anualmente en los estudios de toxicidad. 
REDUCCIÓN: Evitar duplicaciones de estudios; evitar estudios que han 
mostrado ser irrelevantes para el hombre por extrapolación; desarrollando 
estudios complementarios in vitro y ex vivo; aumentando la calidad de las 
pruebas; obteniendo más infor;,ación con un menor número de animales 177l. 
38 
REFINADO: Utilizando nuevas tecnologías y definiendo nuevos "end-points" 
más humanos (por ejemplo, que la muerte no sea un "end-point" en los 
estudios de toxicidad aguda) '78l. 
REEMPLAZO: Desarrollando métodos alternativos, como cultivos de células 
humanas. De hecho, en algunos países de la Unión Europea, para los productos 
cosméticos está prohibido el uso de animales de experimentación '78l. 
2.7. PLANTAS MEDICINALES CON EFECTO HEPATOPROTECTOR. 
Un gran número de plantas medicinales han sido probadas encontrándose 
principios activos como: fenoles, cumarinas, lígnanos, aceite esenciales, 
carotenos, glucósidos, lípidos, alcaloides y flavonoides. Las cuales presentan 
propiedades curativas contra una variedad de enfermedades. 
A nivel regional de lea cabe mencionar a Simón en el 2013,79 l quien reporta 
que el extracto etanolico del fruto de Corryacactus brevistylus posee capacidad 
antioxidante, y a nacional tenemos plantas con actividad antioxidante y 
hepatoprotectora, en el 2005 Santos (so¡, reporta que la especie Gamochacta 
americana posee efecto hepatoprotector en animales de experimentación; en 
el 2007 Troncoso (Bll determinó la actividad antioxidante y efecto 
hepatoprotector del extracto acuoso de Petrosilium sativum en ratas con 
intoxicación inducida por paracetamol. En el 2008 reporta que el extracto 
acuoso de Poemus boldus posee efecto hepatoprotector en ratas con daño 
hepático inducido por"paracetamol. 
39 
Sandoval en el 2008 (82l, reporta otras especies peruanas estudiadas, señala que 
el extracto de Vitis vinífera evidencia efecto hepatoprotector frente al daño 
hepático causado por etanol al 5%. En el 2012 Arnao (83l, menciona que el 
extracto acuoso de las hojas de Smallanthus sonchifo/ius poseen efecto 
hepatoprotector contra el daño hepático generado por paracetamol. 
En otros países se han estudiado una gran variedad de plantas medicinales con 
actividad antioxidante y efecto hepatoprotector algunos de los cuales son: 
Abutilon indicum (84¡ que muestran actividad antioxidante y efecto 
hepatoprotector frente a intoxicaciones inducidas por paracetamol en ratas de 
experimentación. También tenemos los extractos hidroalcoholicos de Aerva 
/anata (8s¡ y de Anogeissus Jatifolia que poseen efecto hepatoprotector en ratas 
contra hepatotoxicidad inducida por paracetamol; las hojas de Alchornea 
cardifolia (86¡ poseen actividad antioxidante y efecto hepatoprotector, 
principalmente las fracciones de acetato de etilo y acetona del extracto 
metanólico. 
Otra planta como Azadirachia indica (87¡ evidencia efecto hepatoprotector 
contra el daño hepático inducido por paracetamol en ratas por la presencia de 
compuestos quercetina y rutina. El extracto metanólico de las hojas de 
Bauhinia purpurea (88¡ ejercieron potencial efecto hepatoprotector que puede 
atribuirse en parte a su actividad antioxidante y alto contenido fenólico. 
40 
Otras de las plantas con efecto hepatoprotector contra lesiones hepatocelular 
inducida por paracetamol debido a su propiedad antioxidante es el extracto de 
Melia azedarach (S9l. El extracto etanólico de las semillas de C/eome viscove (9o) 
evidenció actividad hepatoprotectora contra la lesión hepática inducida por 
paracetamol en ratas albinas. El extracto de E/aeis guineensis (91) posee buena 
actividad antioxidante in vitro y efecto hepatoprotector in vivo en un modelo 
de intoxicación hepática con paracetamol, en ratones. 
Entre otras de las plantas tenemos, el extracto metanólico de las raíces de 
Hemidesmus indicus (92l evidencia un potencial actividad hepatoprotectora en el 
daño hepático producido por paracetamol y tetracloruro de carbono en ratas; 
el extracto acuoso de Physalis peruviana (93l posee actividad antioxidante y 
efecto hepatoprotector potente contra el daño hepático producido por 
paracetamol en ratas. El extracto etanóico de las semillas de Sesamum indicum 
(94l poseen efecto hepatoprotector contra daños en el hígado inducido por 
paracetamol en ratas. 
2.7.1. Ence/ia canescens Lamarck"Hierba lingo" 
2.7.2. Descripción Botánica. 
Encelia canescens Lamarck., familia Asterácea "hierba lindo", es una especie 
autóctona, arbustiva, siempre verde, de hasta 60 cm de altura, el tallo es de 
color verde plomizo por la presencia de pilosidad blanca y muy ramificado. Las 
hojas son pecioladas y alternas. Las inflorescencias son capítulos terminales con 
41 
involucro con dos filas de brácteas lanceoladas. Las flores marginales y liguladas 
son femeninas y de color amarillo; las flores centrales y tubulosas, de color 
café, pentadentadas, con receptáculo calicino gamosépalo (sin dientes) que 
rodea al ovario, y un penacho de pelos blancos; estambres con anteras unidas; 
ovario ínfero con estilo dividido en 2 ramas pilosas. El fruto es un aquenio (95l. 
2. 7 .3. Distribución Geográfica. 
Se desarrolla en suelos arenosos y secos, en laderas de cerros y bordes de la 
carretera común a lo largo de la costa peruana, de la 1 hasta IV Región de Chile 
e interior norte de Argentina (96l. Distribución en el Perú por los departamentos 
de Piura, Cajamarca, Lambayeque, La Libertad, Ancash, Lima, lea, Arequipa y 
Tacna. 
2.7.4. Uso en la medicina popular. 
A la especie peruana le atribuyen propiedades como galactófora, analgésica y 
contra la retención de orina (97l. Otras especies del género se utilizan como 
analgésico para el dolor de muelas (9sl .. Otros lo usan como planta ornamental y 
apícola (99l, también forman los llamados corredores biológicos, que tienen por 
finalidad actuar como refugio para animales, atraer insectos benéficos y 
presentar un medio de protección al cultivo (loo¡. 
42 
111. MATERIALES 
y 
43 
-
, 
METODOS · 
3.1. MATERIALES. 
3.1.1. Material biológico. 
- Tallos secos de Encelia canescens Lamarck ''hierba lingo". 
- Ratas albinas cepa Holtzman hembras de 120- ~10 g. 
- Ratones albinos cepa Bal C hembras de 25 - 30 g. 
3.1.2. Materiales de vidrio. 
Los necesarios para la realización del trabajo de laboratorio. 
3.1.3. Reactivos y disolventes. 
Set enzimático de aminotransferasas EliTech Clinical Syctems, 
3.1.4. Medicamentos. 
- Paracetamol (APAP). 
- Silimarina (SIL). 
3.1.5. Equipos. 
- Equipo de reflujo. 
- Balanza analítica. 
- Rotavapor marca HEIDOLPH modelo LABOROTA 4000, con baño de agua 
termostatizable B-480 y bombas de vacío B-270. 
- Analizador semi automático Microlab. 
- Centrifuga universal. 
44 
3.2. METODOLOGÍA ANALÍTICA. 
3.2.1. Estudio fitoquímico. 
3.2.2. Recolección, selección, secado y conservación de la muestra. 
Los tallos de Encelia canescens Lamarck ((Hierba -lingo" fueron recolectados de 
forma manual con ayuda de pobladores del lugar, en el mes de junio del 2014 
en el poblado de Huarangal distrito de Yauca del Rosario, provincia de lea, 
departamento de lea, a una altitud de 750 a 1050 msnm. Una parte fue enviada 
al Museo de Historia Natural de la Universidad Mayor de San Marcos, para su 
clasificación botánica. 
Luego se seleccionó los tallos enteros en buen estado, separando manualmente 
los deteriorados, manchados y con señales de ataques por hongos; luego 
fueron sometidos a sequedad sin exposición a los rayos solares en una 
superficie limpia por un periodo de 14 días. Se obtuvo aproximadamente 1500 
g de muestra vegetal. 
3.2.3. Clasificación taxonómica de la especie vegetal. 
La autenticidad de la especie fue confirmada en el Museo de Historia Natural 
de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Lima- Perú (anexo 01). 
3.2.4. Obtención del extracto etanólico. 
Se realizó por el método de reflujo, en un matraz de 2000 mL en el cual se 
colocaron los tallos secos de la planta en mención y etanol de 96 oc. El proceso 
de extracción se realizó por espacio de 4 horas. 
45 
Posteriormente el extracto fue sometido a sequedad en un evaporador 
rotatorio a presión reducida a una temperatura de 40 oc, obteniéndose 250 g 
de extracto seco de color verde oscuro. 150 g del extracto etanólico fue 
utilizado para realizar la toxicidad aguda y el efecto hepatoprotector, y 100 g 
del extracto etanólico utilizado para realizar el Screening fitoquímico. 
• Porcentaje de rendimiento del extracto etanólico seco de la obtención del 
extracto etanólico. 
El porcentaje de rendimiento del extracto etanólico seco (%EES) fue de 6%. 
Este resultado fue obtenido con la siguiente expresión: 
Peso final del extracto seco 
%EES=-------------------- X 100 
Peso inicial de la muestra seca 
250 
%EES = X 100 
1500 
%EES = 16.6 
3.2.5. Screening Fitoquímico. 
~.2.5.1. Obtención de Fracciones. 
Se utilizó 100 g del extracto etanólico la cual viene a ser la Fracción A; del cual 
se separó 2 ml para realizar la correspondiente reacción de identificación. 
Luego se extrajo con HCI al 1% (2X20 mL) empleando una pera de bromo, se 
filtró y se obtuvo dos partes: la insoluble y la solución ácida (la soluble). 
46 
Insoluble: Se lava hasta pH neutro con agua destilada, seguidamente fue 
disuelta con 5 ml de diclorometano, se seca con sulfato de sodio anhidro y se 
filtra para obtener la Fracción B. 
Solución acida: Se filtra y alcaliniza con Hidróxido de amonio y se extrae con 
diclorometano (2X25 ml) obteniéndose dos fases: 
Fase Diclorometánica: Se lava con 10 ml de a~ua destilada, luego la fase 
diclorometánica se seca con sulfato de sodio, se filtra y se obtiene la Fracción C. 
Fase Acuosa: Se satura con 5 g de sulfato de sodio anhidro y se extrae con 
diclorometano: etanol (3:2) (2X25ml) en una pera de bromo. Obteniéndose dos 
fases: 
Fase Orgánica: (Diclorometánica-etanólica). Se lava con la solución de sulfato 
de sodio anhidro reuniendo las fases acuosas. 
Seguidamente la fase orgánica se deshidrata con 1 g de sulfato de sodio 
anhidro. 
Se filtra y esto constituye la Fracción D. 
Fase Acuosa: A esta se adiciona los residuos acuosos obtenidos del lavado de la 
fase orgánica, esto constituye la Fracción E. 
3.2.5.2. Detección de grupos funcionales y metabolitos secundarios. 
Separadas las fracciones se procedió a realizar sobre estas reacciones de 
coloración o precipitación para identificar grupos funcionales y metabolitos 
secundarios. 
47 
• FRACCIÓN A. 
Detección de Taninos. 
Reacción de Gelatina -Sal: Se vierte 0,5 mL de extracto sobre 5 mL de solución 
de NaCI 5%, Gelatina 1% y Gelatina - Sal la precipitación con este último 
reactivo o con ambos el 12 y 2º es indicativo de la presencia de taninos, si 
solamente ocurre con el1º, podría ser un falso positivo. 
Reacción de Cloruro Férrico: En un tubo de ensayo se cOlocó 0,5 mL de la 
Fracción A y se le agregó una gota de solución acuosa de FeCb 1%. 
La reacción es positiva cuando aparecen colores de azul-negro, verde o azul 
verdoso. 
Detección de Aminoácidos. 
Reacción de Ninhidrina: Sobre tiras de papel filtro se coloca con una pipeta 
capilar: 
a. Una gota de Fracción A+ una gota del reactivo Ninhidrina al 2%. 
b. Blanco: Solución etanólica de Ninhidrina al 2%. 
c. Testigo: Una gota de solución de Metionina 5%. 
Luego del s~cado a temperatura ambiente las tiras de papel se colocan en la 
estufa a 110 - 120 ·e hasta la aparición de un color en el blanco. Se compara 
con la mancha azul violácea de la solución testigo. 
La reacción es positiva si el papel de la muestra presenta un color azul violáceo. 
48 
Detección de Flavonoides. 
Reacción de Shinoda: En una placa se vertieron 3 gotas de la Fracción A, 
limaduras de Mg, y 2 gotas de HCI concentrado. 
La reacción es positiva cuando aparecen tonos de color rojo, anaranjado y 
violeta. 
• FRACCIÓN B. 
Detección de Triterpenoides y/o Esteroides. 
Reacción de Liebermann Burchard: Sobre 1 mL de la fracción se vertieron 5 
gotas de ácido acético y 3 mL de anhídrido acético/ácido sulfúrico (50:1). 
La reacción es positiva si aparecen colores verde, azul verdoso (vías rojo o azul). 
Detección de Antraquinonas. 
Reacción de Borntrager: Sobre el resto de la Fracción B se agrega 5 mL de NaOH 
5% y se agita suavemente. 
La reacción es positiva si la fase acuosa toma un color rojo. 
• FRACCIÓN C. 
Detección de Esteroides y/o Triterpenoides. 
Reacción de Liebermann Burchard. 
Detección de Cardenólidos. 
Reacción de kedde: Solución A: ácido 3,5-dinitrobenzoico 2% en metano!. B: 
Hidróxido de potasio 5,7% en agua. Mezclar a + b, volúmenes iguales esto 
constituye el reactivo (R). 
Colocar en un tubo de ensayo 1 mg de muestra + 2 gotas del reactivo. 
49 
Si la r~acción es positiva se formará un color púrpura o violáceo. 
Detección de Alcaloides. 
El resto de la Fracción C se evapora a sequedad y luego se agrega 2 mL de HCI 
1%, filtrar. Se realizan las reacciones de precipitación, de Dragendorff, Mayer, 
Hager y Wagner. 
La reacción es positiva si aparece un precipitado. 
• FRACCIÓN D. 
Se evaporó a sequedad y luego se agregó 2,5 mL de etanol, efectuándose las 
siguientes reacciones. 
Detección de Flavonoides: Reacción de Shinoda. 
Detección de Leucoantocianidinas y Catequinas. 
Reacción de Rosenheim: A 2 mL de la Fracción D se agregó 0,1 mL de HCI 
concentrado, se calienta durante 10 minutos a 100 oc, se enfría y se adiciona 2 
mL de agua y 0,4 mL de alcohol amílico; agitar y observar el color en la fase 
amílica. 
La reacción es positiva si aparece un color que va desde el rosado débil hasta 
carmesí oscuro. 
Si es rojo indica presencia de Antoncianidinas. Si es marrón indica la presencia 
de Catequinas. 
Detección de Cardenólidos: Reacción de Kedde. 
Detección de Esteroides y/o Triterpenoides: Reacción de Liebermann 
Burchard. 
50 
Detección de Alcaloides: Reacción de M ayer, Dragendorff, Hager y Wagner. 
• FRACCIÓN E. 
Detección de Flavonoides: Reacción de Shinoda. 
Detección de leucoantocianidinas: Reacción de Rosenheim. 
TOlÜI>os 
Ninhi:fñr:¡¡ 
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R.Shin~Oil 
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R. Shinodo 
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R. Ro.senh-cim 
CUl!enÓfidos 
R. Keéd• 
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Tñterp:nos 
R.tiebe:rm.nm 
FIGURA Ng 04. Screening Fitoquímico (101l. 
51 
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C~te 4 hora y .se Rtr:. en 
G!i!onte. 
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CH:O:: EI:OH 
3:2 
Fkii.'OftOiées 
R. .shin::.d~ 
Levromt:xienñ!ins 
R. Ro.se:nheim 
3.3. EVALUACIÓN DE LA TOXICIDAD AGUDA. 
Para la evaluación de la toxicidad aguda se tuvo en cuenta el princ;ipio de las 
3Rs 1102•103¡ Se emplearon ratones albinos hembrélS, sanas con un PC:tSD de 20 -
30 g, provista por el bioterio de la Universidad_ Nacional Agraria La Malina 
(UNALM). Se utilizaron 2 ratones de control y S rc;¡tones tratados. Lps animales 
se mantuvieron durante el ensayo (14 días) con alimentación peletizada y 
agua ad libitum, en condiciones ambientales estandarizadas. 
3.3.1. Método Experimental. 
Para el ensayo se empleó la dosis límite, metodología y diseño experimental 
descrito por las normas EPA (Agencia de Protección Ambiental) 870.1100, OECD 
425 (Organización Económica para el Comercio y Desarrollo) 1104•105¡. El extracto 
etanólico de Encelia canescens Lamarck "hierba lingo" fue administrada a una 
dosis de 2000 mg/Kg de peso por única vez por vía oral. El alimento fue 
retirado 12 horas antes de comenzar el experimento y vuelto a suministrar 3 
horas después de la administración. Durante el período de ensayo los animales 
fueron observados individualmente durante los primeros 30 minutos, 2 horas, 8 
horas, 24 horas, 48 horas, 7 días hasta los 14 días del experimento; para de 
esta forma llevar a cabo el control de la mortalidad, comportamiento, consumo 
de alimento y síntomas clínicos de toxicidad evidente. 1106¡ La evaluación incluyó 
la relación que puede existir entre los ratones tratados y grupo control que 
recibió el vehículo (tween 10%). Dentro de las observaciones de signos y 
síntomas de toxicidad se determinó: Ataxia, parálisis de patas anteriores y 
52 
posteriores, alarma, piloerección, equilibrio, Péllidez, erección eje la cola, 
actividad motora, reflejo cornea!. Se controló el peso vivo de los animales en 
los días 1, 7 y 14 días del experimento como uno de los parámetros 
demostrativos de toxicidad. Al finalizar el experimento se procedió al sacrificio 
de los animales por inhalación de éter etílico para (::!1 estudio 
anatomopatológico macroscópico del cerebro, estómago hígqdo, bazo, 
pulmones, riñones, e intestinos. 
3.4. EVALUACIÓN DEL EFECTO HEPATOPROTECTOR. 
Para el estudio se usó ratas hembras, raza Holtzman, con un peso promedio de 
120 a 210 g, procedentes del bioterio de la Universidad Nacional Agraria La 
Malina (UNALM). Los animales se aclimataron una semana y se les pesó cada 
dos días. Se les alimentó con dieta obtenida de UNALM y agua ad líbitum, en 
condiciones ambientales estandarizadas. 
3.4.1. Método experimental. 
Se procedió a formar aleatoriamente los cinco grupos de estudio (n=S). Antes 
del tratamiento con el extracto etanólico, se les retiró el alimento y recibieron 
por vía orogástrica durante cinco días lo señalado: 
Grupo 1 (control normal) y grupo 11 (control APAP) se les administró Tween 10%. 
A los grupos 111, IV se les administró por vía orogástrica el extracto etanólico de 
los tallos de Encelia canescens Lamarck a dosis de 200 y 400 mg/Kg 
respectivamente, mientas que a los animales del grupo V se les administró SIL 
a dosis de 300 mg/Kg. Pasado 1 hora a todos los grupos 11, 111, IV y V, se les 
53 
administró APAP a dosis de 250 mg/Kg. Después de 1 hora se procedió a la 
realimentación. 
Al sexto día, después de la administración de los respectivos tratamientos a 
todos los animales se les extrajo sangre por punción cardiaca para los ensayos 
bioquímicos. 
3.4.2. Ensayos Bioquímicos. 
Se recolectaron muestras de sangre, se centrifugaron a 3000 r.p.m durante 10 
minutos para obtener el suero, el cual se sometió a continuación a la 
determinación de los niveles de las enzimas transaminasas: alanina 
aminotranferasa (ALT o TGP), aspartato arninotransferasa (AST o TGO), 
fosfatasas alcalina (FAL), proteínas totales y albúmina. 
3.4.2.1. Determinación de la alanina aminotransferasa (AL T o TGP). 
Método. 
Método lFCC (Federación Internacional de Química Clínica) sin fosfato de 
piridoxal. 
Cinético UV. 
Fundamento del método. 
Determinación cinética de la actividad de la alanina aminotransferasa (ALT) 
L- Alanina + cetoglutarato ALT 
. ) Piruvato + L- Glutamato. 
Piruvato + NADH + H+ LDH 
.... ). L- Lactato+ NAD + 
LDH: Lactato deshidrogenasa. 
54 
Composición de los reactivos. 
Reactivo 1: Rl 
Tampón Tris, pH 7.SO (30 ºC), L-Aianina, LDH. 
Reactivo 2: R2 
Cetoglutarato, NaOH. 
Muestra. 
Suero· 
Material requerido. 
Analizador semi automático, Mkropipetas, cronómetro. 
Condición de la reacción. 
Longitud de onda 340 nm, temperatura 37ºC. 
Procedimiento. 
Programar en el·analizador la enzima que se va analizar, la longitud de onda y 
temperatura. En primer lugar leer con agua destilada, en un tubo mezclar 200 
ul del reactivo 1 y SO ul del reactivo 2, esperar 2S segundos y agregar 2S ul de 
la muestra; mezclar y después de SO segundos de incubación medir el cambio 
de absorbancia por minuto (A/min) durante 1SO segundos. 
Cálculos de los resultados. 
ALT (U/L)=A/min X 1746 
55 
3.4.2.2. Determinación de aspartato aminotransferasa (AST o TGO). 
Método. 
Método IFCC (Federación Internacional de Química Clínica) sin fosfato de 
piridoxal. 
Cinético UV. 
Fundamento del método. 
Determinación cinética de la actividad de aspartato aminotransferasa (AST). 
L- Aspartato + cetoglutarato ____ A5_~, .) Oxalacetato + L- Glutamato. 
Oxalacetato + NADH + H+ ..,..--M""'L"'""D"'""H·-::'·.>~ 
MLDH: Malato deshidrogenasa. 
Composición de los Reactivos. 
Reactivo 1: Rl 
Malato+ NAO+ 
Tampón Tris, pH 7.80 {30 ºCJ, L-Aspartato, MLDH. 
Reactivo 2: R2 
Cetoglutarato, NaOH. 
Muestra. 
Suero 
Material Requerido. 
Analizador semi automático, Micropipetas, cronómetro. 
Condición de la Reacción. 
Longitud de onda 340 nm, temperatura 37ºC. 
56 
Procedimiento. 
Programar en el analizador la enzima que se va analizar, la longitud de onda y 
temperatura. En primer lugar leer con agua destilada, en un tubo mezclar 200 
ul del reactivo 1 y 50 ul del reactivo 2, esperar 25 segundos y agreaar 25 ul de 
la muestra; mezclar y después de 50 segundos de incubación medir el cambio 
de absorbancia por minuto (A/min) durante 150 segundos. 
Cálculos de los resultados. 
AST (U/L)=A/min X 1746 
3.4.2.3. Determinación de fosfatasa alcalina (FA). 
Método. 
Basados en las recomendaciones de la DGKC (Sociedad Alemana de Química 
Clínica) y de la SCE (Comisión de Enzimas de la Sociedad Escandinava de 
Química Clínica y Fisiología Clínica), enzimático cinético. 
Fundamento del método. 
En presencia de iones de Mg2• y diatanolamida como aceptar de fosfatos, el 
p-Nitrofenilfosfato es hidrolizado por las fosfatasas en fosfato y p-Nitrofenol 
(sustancia de color amarillo). 
p-Nitrofenilfosfato + H2 O ~~~~A~~~~L~~~N~, ~ fosfato inorgánico+ p-Nitrofenol 
Composición de los reactivos. 
Reactivo l:Rl 
Dietanolamida, pH 10.2, Cloruro de magnesio. 
57 
Reactivo 2:R2 
p-Nitrofenilfosfato 
Muestra. 
Suero 
Procedimiento. 
En el analizador programar la longitud de onda 40S nm, temperatura 37 °C. En 
primer lugar leer con agua destilada, en un tubo mezclar 2SO ul del reactivo 1 y 
80 ul del reactivo 2, esperar 2S segundos y agregar S ul de la muestra; mezclar 
y después de SO segundos de incubación medir el cambio de absorbancia por 
minuto (A/min) durante 7S segundos. 
Cálculo. 
FAP U/L = A/min X 2750 
3.4.2.4. Determinación de proteínas totales. 
Método. 
Biuret. 
Fundamento del método. 
Las proteínas séricas forman un complejo colorado en presencia de sales de 
cobre en un medio alcalino. 
Proteínas + Cu2+ 
Composición de los reactivos. 
Reactivo: R 
complejo colorado. 
58 
Yoduro de potasio, tartrato de potasio y sodio, sulfato de cobre, 
hidróxido de sodio, estándar y albúmina. 
Muestra. 
Suero. 
Procedimiento. 
En el analizador programar la longitud de onda 546 nm, temperatura de 37 oc. 
Se procede como se muestra en la tabla Nº 02. 
TABLA Nº 02. Preparación de la muestra. 
Blanco Calibración Prueba 
Agua 3 ul 
destilada 
Muestra 3 uL 
Mesclar y leer la absorbancia (A) tras 11 minutos y30 segundos de incubación. 
Cálculo de resultados. 
A de la muestra. 
X n n= Concentración del estándar. 
A de estándar. 
3.4.2.5. Determinación de albúmina. 
Método. 
Calorimétrico. 
BBG (verde de bromocresol) 
59 
Fundamento del método. 
Determinación calorimétrica de la albúmina utilizando verde de bromocresol a 
pH 4,20. 
Albúmina + BBG pH 4.20 
.... ) Albúmina-BBG complejo. 
Composición de Jos reactivos. 
Reactivo R 
Tampón de succinato pH 4.20, verde de bromocresol, Bnj 35 
estándar, albúmina bovina. 
Muestra. 
Suero. 
Procedimiento. 
Programar la longitud de onda 800 nm, temperatura de 37 oc. 
Proceder como se muestra en la tabla Nº 03. 
TABLA Nº 03. Preparación de la muestra. 
Blanco 
L · Reactivo R · · · .310ul ..... . 
Agua 
destilada 
[~~E:stá_!lóar:_:_~· ~¡:;:-::~.· 
Muestra 
2 ul 
',-<"<·. 
,~-· ~~~, 
Calibración 
. 310 ut ·· · 
Prueba 
Mezclar y leer la absorbancia después de 25 segundos de incubación. 
Cálculo de los resultados. 
A muestra Xn n= concentración del estándar. 
A estándar 
60 
3.4.2.6. Análisis histopatológico. 
Para la evaluación histopatológica las muestras de hígados extraídas de las 
ratas tratadas fueron fijadas en formol al 10%, luego se hicieron los 
correspondientes cortes histopatológicos. 
3.4.3. Análisis estadístico. 
Los resultados obtenidos en este estudio se expresaron en valores promedios y 
sus desviaciones estándar, efectuándose además pruebas inferenciales entre los 
grupos experimentales, paramétricas y no paramétricas. Se trabajó con un nivel 
de significación de 0,05; considerándose significativo un p<0,05. El análisis de los 
resultados se realizó usando los programas Stata for Windows (versión 12;0) y 
Graph Pad Prism for Windows (versión 6,05). 
61 
IV. RESUL lADOS 
62 
4.1. ESTUDIO FITOQUÍMICO. 
4.2. Clasificación taxonómica. 
Como resultado de la clasificación Taxonómica según la Clasificación de 
Cronquist (1988) y determinado por el M ag. Hamilton Beltran. 
División: Magnoliophita 
Clase: Magnoliopsida 
Subclase: Asteridae 
Orden: Asterales 
Familia: Asteraceae 
Género: Encelia 
Especie: Encelia canescens Lamarck 
Nombre vulgar "hierba lingo" 
63 
4.3. Scrining Fitoquímico. 
TABLA Nº 04. Resultados del Screening Fitoquímico del extracto etanólico de 
Encelia canencens Lamarck. 
B 
D 
Esteroides/Triterpenos 
Antraquinonas 
Leucoantocianidinas 
Cardenólidos 
Esteroides/triterpenos 
Alcaloides 
64 
+ 
+ 
+ 
4.4. TO?<ICIDAD AGUDA. 
4.4.1. Comportamiento del peso corporal. 
La administración del producto a dosis límite 2000 mg/Kg no afectó el 
incremento de peso de los animales respecto al grupo control, comportándose 
dentro de los parámetros establecidos del modelo biológico, como se puede 
apreciar en las Tablas NR OS y 06. 
TABLA NR OS. Relación de la media de pesos corporales y su variación en el 
grupo control. 
Grupo 
control 
1 
2 
Promedio 
Día 1 
25 
27 
26 
Peso corporal en (g) 
Día 7 Día 14 .ó.P 
26 27 2 
29 29 2 
27,S 28 2 
0;) 
TABLA N!! 06. Relación de la media de pesos corporales y su variafión en los 
grupos tratados. 
Grupos Peso corporal en (g) 
tratados Día 1 Día 7 Día 14 AP 
1 25 26 27 2 
2 24 25 28 4 
3 28 28 30 2 
4 27 29 30 3 
5 26 27 29 3 
Promedio 26 27 28,8 2,8 
4.4.2. Síntomas clínicos. 
Las observaciones clínicas durante el período de ensayo no arrojaron 
alteraciones en los diferentes sistemas estudiados. Los parámetros evaluados 
permanecieron normales en los animales tratados como: actividad motora, 
reflejo corneal, consumo de alimento y agua, y ausencia de ataxia, parálisis de 
patas anteriores y posteriores, alarma, piloerección, palidez, erección de la cola. 
La supervivencia fue de un 100 por ciento. 
66 
4.4.3. Exámen anatomopatológico macroscópico 
El estudio del exámen anatomopatológico macroscópico de los órganos cerebro, 
estómago hígado, pulmones, riñones, e intestinos, buscando posibles signos de 
toxicidad, no evidenciaron alteraciones -patológicas en los órganos analizados en 
comparación con el grupo control. 
4.5. EFECTO HEPATOPROTECTOR. 
TABLA Nº 07.Efecto del extracto etanólico de Encelia canescens Lamarck sobre 
valores de ASTen ratas con daño hepático inducido por paracetamol. 
Grupo Experimental Valores de AST U/L Promedio ± D. E. 
APAP + Extracto etanólico de Encelia ± 
canescens Lamarck 400 mg/kg1'1 · 
(1) Hay diferencia estadísticamente significativa entre todos los grupos a un 
p<O,OS Test de Kruskal Wallis. 
(11) Posee diferencia significativa con respecto al APAP p < 0,05 Test de Dunns. 
67 
300.00 
250.00 
< 200.00 
::::1 
~ 150.00 
o ¡¡¡ 
> 100.00 
50.00 
0.00 
Control APAP APAP+ APAP+ Silimarina 
Extracto Extracto 300 
etanolico etanolico mg/kg• 
200 mg/Kg 400 mg/kg 
Gráfico 01 
• Control 
DAPAP 
I'.Jl APAP + Extracto etanolico 
200 mg/Kg 
• APAP + Extracto etanolico 
400mg/kg 
i1J Silimarina 300 mg/kg* 
Efecto del extracto etanólico de Encelia canescens Lamarck sobre 
valores de AST en ratas con daño hepático inducido por paracetamol 
En la Tabla Nº 07. se observa los niveles séricos de AST, en donde se observa una 
diferencia estadísticamente significativa entre todos los grupos a un p<O,OS (Test 
de Kruskal Wallis), se observa que el grupo APAP produjo mayores niveles (254,6 
U/L) que el grupo control (54 U/L) y el grupo del extracto etanólico de ECL de 400 
mg/Kg produjo menores niveles (81,6 U/L). Sin embargo, al comparar el grupo de 
Silimarina a 300 mg/Kg (65 U/L) con grupo APAP tuvo una diferencia significativa 
a un p<O,OS (Test de Dunns). 
68 
TABLA Nº 08. Efecto del extracto etanólico de Encelia canescens Lamarck sobre 
valores de ALT en ratas con daño hepático inducido por paracetamol. 
Grupo Experimental Valores de ALT U/L 
Promedio± D.E. 
i:eontroll'l. !' .... , ' ,•· 50,0_' '.•· .,·:±:···· ;; __ , 
l.' ' '"'A·¡:;¡¡:;·zso-~g/l<i1 ':ill --- ---........ --~"-·---- -- -···. _____ ; ________ i39;o------~------ 9:2 _____ _j 
¡-APAP-¡:Extractó etañóTico "d·e-Enc;iiiicam!'sce~i- -83~4--------±----- ·6;5-- ---
r .. .- .. 
¡ l.am~;ck 2oo•·mg?kguf 
APAP +Extracto etanólico de Encelia canescens 68,2 ± 4,7 
Lamarck 400 mg/kgl'l 
(1) Hay diferencia estadísticamente significativa entre todos los grupos a un 
p<O,OS Test de Kruskal Wallis. 
(11) Posee diferencia significativa con respecto al APAP p < 0,05 Test de 
Dunns. 
..... 
160.0 
140.0 
120.0 
::;- 100.0 
~ 80.0 
... 
o ~ 60.0 
40.0 
20.0 
0.0 
11 Control 
DAPAP 
!?A APAP +Extracto etanólico 
200 mg/Kg 
11 APAP +Extracto etanólico 
400 mg/kg 
Control APAP APAP + APAP + Silimarina l:1l SiJimarina 300 mg/kg* 
Extracto Extracto 300 
etanólico etanólico mg/kg* 
200 mg/Kg 400 mg/kg 
Grafico 02 
Efecto del extracto etanólico de Ence/ia canescens Lamarck sobre 
valores de Al Ten ratas con daño hepático inducido por paracetamol 
69 
En la Tabla Nº 08. se observa los niveles séricos de ALT, en donde se observa una 
diferencia estadísticamente significativa entre todos los grupos a un p<O,OS (Test 
de Kruskal Wallis), se observa que el grupo APAP produjo mayores niveles (139.0 
U/L) que el grupo control (SO U/L), y el grupo del extracto etanólico de ECL de 
400 mg/Kg produjo menores niveles (68,2 U/L). Sin embargo, al comparar el 
grupo de Silimarina a 300 mg/Kg (53,8 U/L) con grupo APAP tuvo una diferencia 
significativa a un p<O,OS (Test de Dunns). 
TABLA Nº 09. Efecto del extracto etanólico de Encelia canescens Lamarck sobre 
valores de Fosfatasa Alcalina en ratas con daño hepático inducido por 
. paracetamol. 
Grupo Experimental Valores de Fosfatasa Alcalina 
U/L Promedio± D.E. 
1 Contro1 11l 250,6 ± 9,9 · { 
i ' ' ' ' ¡ 
l---··-· ~------- ""' --·------"-"~---·-··-._, _ _:__ ... _____ ._. ____ .. ___ . ____________ . ___ ,,,_j 
APAP + 250 mg/Kg11•111 620,0 ± 52,9 
rAPAP-+Éxtracto etañóTico de-Eñceiia -.~--- ----------s1i,8· -----± ~.--.. ~Í4,i----~ 
1 canescens Lamarck 2.00 mg/Kglll ' · . · ! 
l:., ___________ .__:_ ____ ~_ .... ,. ___________ . ____ . ...:_ _______ ,_._. __ ,_.,_.~--·-·--·---· .. : .. _____ . __________ j 
APAP + Extracto etanólico de Ence/ia 358,0 ± 8,6 
canescens Lamarck 400 mg/kg111 
~ .. -,------------------(fll)--------------·----
1 APAP +Silimarina 300 mg/Kg' · 317,6 ± ! . 
(1) Hay diferencia estadísticamente significativa entre todos los grupos a un 
p<0,05 Test de Kruskal Wallis. 
(11) Posee diferencia significativa con respecto al APAP p < 0,05 test de Dunns. 
70 
700.0 
600.0 
..... 500.0 
~ 
"' 400.0 
a¡ 
.2 300.0 
111 
> 200.0 
100.0 
0.0 
11 c;ontrol 
DAPAP 
!'i:l APAP +Extracto etanólico 
200mg/Kg 
B APAP +Extracto etanólico 
400 mg/kg 
Control APAP APAP+ APAP+ Silimarina El Silimarina 300 mg/kg* 
Extracto Extracto 300 
etanólico etanólico mg/kg* 
200 mg/Kg 400 mg/kg 
Gráfico 03 
Efecto del extracto etanólico de Encelia canescens Lamarck sobre 
valores de Fosfatasa Alcalina en ratas con daño hepático inducido 
por paracetamol 
EN LA TABLA Nº 09. se observa los niveles séricos de FA, en donde se observa 
una· diferencia estadísticamente significativa entre todos los grupos a un p<0,05 
(Test de Kruskal Wallis), se observa que el grupo APAP produjo mayores niveles 
(620,0 U/L) que el grupo control (250,6 U/L), y el grupo del extracto etanólico de 
ECL de 400 mg/Kg produjo menores niveles (358,0 U/L). Sin embargo, al 
comparar el grupci de Silimarina a 300 mg/Kg (317,6 U/L) con grupo APAP tuvo 
una diferencia significativa a un p<0,05 (Test de Dunns). 
71 
TABLA Nº 10. Efecto del extracto etanólico de Encelia canescens Lamarck sobre 
valores de Proteínas Totales en ratas con daño hepático inducido por 
paracetamol. 
Grupo Experimental Valores de Proteínas totales g/dl 
Promedio ± D.E. 
[.dmtrOI'(I). ···. · .. '"). ·, , . . - '.'6¡0 . '±' . ., .. ·, 0,3. '·'\ 
L!~~~_:~-~~,~----:_::.ic:..~~~-~------~----L~:- ·:·~,~'--~~~--·:-~-~ _-"~,~~-~~~:~:: .. ~L~-~~~~2;{.·:-·':l 
APAP 250 mg/Kg 11·"1 4,5 ± 0,5 
r APAP+--exiractoet~-:-ñolic<t'de Enceíia-------¡;~- . ±~---- 0,3'1 
1 ' ' l i canescens LamQrck 200 mg/Kg111 _ _ ¡ 
L ..:: .. ""~--~--'------·--~--------~-~---"--· --~~~ _ _:_ _______________ "-~~~~--------_:__, __ .c.:;____ . ______________ 1 
APAP + Extracto etanolico de Encelia 4,7 ± 0,6 
canescens Lamarck 400 mg/kg lll 
1 APAP+ Sllimáriná,30ómg/kg u;n¡~'7"--. 
¡ 
± 
---------1 
'' 0,4 ¡ 
(1) Hay diferencia estadísticamente significativa entre todos los grupos a un 
p<0,05 Test de ANOVA. 
(11) Posee diferencia significativa con respecto al APAP p < 0,05 test de Tukey 
72 
j 
7.0 
6.0 
.... 5.0 
"C 
tia 4.0 
"' Ql o 3.0 
ñi 
> 2.0 
1.0 
0.0 
Control APAP APAP + APAP + Silimarina 
Extracto Extracto 300 mg!kg• 
etanólico etanólico 
200 mg/Kg 400 mg/kg 
Gráfico 04 
11 Control 
DAPAP 
m APAP +Extracto etanólico 
200mg/Kg 
11 APAP +Extracto etanólico 
400mg/kg 
!lil Silimarina 300 mg/kg* 
Efecto del extracto etanólico de Encelia canescens Lamarck sobre 
valores de Proteinas Totales en ratas con daño hepático inducido por 
paracetamol 
En la Tabla Nº 10. se observa Jos niveles séricos de Proteínas Totales, en donde 
se observa una diferencia estadísticamente significativa entre todos los grupos a 
un p<O,OS (Test de ANOVA), se observa que el grupo APAP produjo menores 
niveles (4.5 g/dL) que el grupo control (6.0 g/dL), y el grupo del extracto 
etanólico de ECL de 400 mg/Kg produjo f11ayores niveles (4.7g/dL). Sin embargo, 
al comparar el grupo de Silimarina a 300 mg/Kg (5.3 g/dL) con grupo APAP tuvo 
una diferencia significativa a un p<O,OS (Test de Tukey). 
73 
TABLA Nº 11. Efecto del extracto etanólico de Encelia canescens Lamarck sobre 
valores de Albúmina en ratas con daño hepático inducido por paracetamol. 
Grupo Experimental Valores de Albúmina g/dl 
Promedio ± D.E. 
¡ Co11trol 111 .· , .. 4,0 t· . Q,S l 
_1 --···-··------- --·------- -- ---~-~.....:.. ...... ~-----·'---------------·-·---.. ..:......--.. -~--------·-..:·-···--·-J 
APAP + 250 mg/Kg11'111 3,1 ± 0,6 
r-· ---_ -~-----. ~:----~---. ~---. --. ------~-----------.. -~-----~-------.... --. ~-APAP +Extracto etanólico· de Encelia 3,3 ; :f 0,4 ! 
l < 1 1 . 
t -¡ canescens Lamarck ~00 mg/Kg1II 
L~-·- ------------------------- ----- ---- ________ __:__ __ ---~-:----~------'-:...... --- -- '"·-------
APAP + Extracto etanólico de Encelia 3,3 ± 0,2 
canescens Lamarck 400 mg/kg111 
,..----------:----.-----¡1"11¡--~---·---·-------------------------: 
,.APAP+Silimarina300nig/Kg' .. · :·.~ . 3,7 ·.· ± . _0,4 - ¡ 
! ~ ¡ 
: ' 
(1) Hay diferencia estadísticamente significativa entre todos los grupos a un 
p<O,OS Test de ANOVA. 
(11) Posee diferencia significativa con respecto al APAP p < 0,05 test de Tukey. 
5.0 
4.5 
4.0 
=a 3.5 
C¡¡ 3.0 
:3 2.5 
..2 2.0 
~ 1.5 
1.0 
0.5 
0.0 
Control APAP APAP + APAP + Silimarina 
Extracto Extracto 3 00 m g/kg* 
etanólico etanólico 
200 mg/Kg 400 mg/kg 
Gráfico OS 
11 Control 
¡¡¡¡¡APAP 
l!íl APAP + Extracto etanólico 
200 mg/Kg 
111 APAP +Extracto etanólico 
400 mg/kg 
D Silimarina 300 mg/kg* 
Efecto del extracto etanólico de Encelia canescens Lamarck sobre 
valores de Albúmina en ratas con daño hepático inducido por 
paracetamol 
74 
En la Tabla Nº 11. se observa los niveles séricos de Albúmina, en donde se 
observa una diferencia estadísticamente SignificatiVp entre todos los wupos a un 
p<O,OS (Test de ANOVA), se observa que el grupo APAP produjo menores niveles 
{3.1 g/dL) que el grupo control (4.0 g/dL), y el grupo del extracto etanólico de ECL 
de 400 mg/Kg produjo mayores niveles {3.3 g/dL) que el grupq APAP. Sin 
embargo, al comparar el grupo de Silimarina a 300 mg/Kg {3.7 g/d~) con grupo 
APAPtuvo una diferencia significativa a un p<O;OS (Test de Tukey). 
4.6. ANÁLISIS ANATOMOPATOLÓGICO E HISTOPATOLÓGICOS. 
Los resultados de los pesos se muestran en la Tabla Nº 12. 
En el análisis histopatológico se observaron por cada lámina en el microscopio de 
luz a 10X y 40X. LOs hallazgos microscópicos se analizaron por campos y se 
compararon con patrones de morfología tisular y celular de hígado normal de 
rata. (Ver Tabla Nº 12 y 13)._ 
75 
TABLA Nº 12. Examen macroscópico y microscópico de las muestras de hígados de 
los diferentes grupos. 
MUESTRA EXAMEN EXAMEN 
MACROSCOPICO. MICROSCOPICO . DIAGNOSTICO. 
HISTOLOGIA. 
Hígado que pesa 4 g Arquitectura Sin lesión celular 
Control Mide 3.5x3xlcm se hepática conservada 
incluye muestra 
representativa le 
Hígado que pesa 9 g. Arquitectura Estatosis de grado 
Mide 3x2 .Sxlcm, se hepática conservada moderado (70%) 
APAP 250 mg/Kg incluye muestra Degeneración lesión celular 
representativa le. vacuolar en el lOO% reversible en el 
y macroestatosis 100%. 
(70%). 
Arquitectura 
APAP+ Hígado que pesa 7 g. hepática conservada. Lesión celular 
Extracto 200 Mide 4.5x2.5x1.5cm Centro lobulillar reversible de los 
mg/Kg. se incluye muestra conservado. hepatocitos (lOO%). 
representativa le. Zona portal normal 
Hepatositos con 
degeneración 
vacuolar en un 
100%. 
Arquitectura Microestatosis 30%. 
APAP +Extracto Hígado que pesa 6 g. hepática conservada. 
400 mg/Kg. Mide 4.5x2.5xlse Centrallobulillar: 
incluye muestra conservado 
representativa le. Zona portal normal 
degeneración 
vacuolar en el 20%. 
Hígado que pesa 5 g. Arquitectura 
Silimarina 300 Mide 2.5x2xlcm, se hepática conservada. Lesión celular 
mg/Kg. incluye muestra Degeneración reversible de los 
representativa le. vacuolar (30%). hepatocitos (20%). 
76 
TABLA Nº 13. Cambios histopatológicos de muestras de hígado de los diferentes 
grupos. 
Lesión Colestasis Lesión 
celular de grado celular 
hepática hepática leve hepática 
reversible reversible esteatosis reversible 
100% de grado 30%1esion 10% 
esteatosis severo celular esteatosis 
70%. (100%) hepática 20% 
reversible 
30% 
77 
V. DISCUSIÓN 
78 
La Encelia canescens Lamarck tiene propiedades galactófora, analgésica y contra la 
retención de orina (97l. 
En cuanto a la determinación de los metabolitos secundarios se obtuvieron a partir 
del extracto etanólico mediante un esquema de screening fitoquímico descrito por 
Look en 1994 (lOll; como se puede apreciar en la tabla Nº 04, casi todas las 
fracciones presentan grupos de compuestos con reconocida actividad 
hepatoprotectora como flavonoides. 
Para el estudio de toxicidad aguda se plantea que si no existe informes anteriores 
de toxicidad de la sustancia que se investiga es posible utilizar una dosis límite de 
2000 mg/Kg de masa corporal para determinar la dosis letal 50 lo que se ajusta 
nuestro estudio dado que la sustancia eh estudio no tuvo toxicidad en su extenso 
de uso tradicional. 
En lo referente al daño hepático, el paracetamol se metaboliza de un 90-95% a nivel 
hepático y su excreción es por el riñón, además es un medicamento que 
administrado a elevadas dosis o el uso crónico se asocia comúnmente con la 
hepatotoxicidad y nefrotoxicidad en los seres humanos y los animales (107l. La 
toxicidad hepática producida por el paracetamol ha sido descrita por diversos 
autores (9, 51• 54• 53• 56• 64l. Según Boyd, 1966 y Goldstein, 2002 el daño a nivel hepático 
puede ser evaluado de diversas formas; una de ellas la constituye la medición de la 
actividad de enzimas como transaminasas, fosfatasa alcalina, proteínas totales y 
albúmina, cuya elevación en suero evidencia el daño celular que causa el 
paracetamol. 
79 
En nuestro estudio se evidencia una marcada elevación séricos de AST, ALT, FA; y 
una disminución de Proteínas totales y Albúmina en las ratas tratadas con APAP a 
dosis de 250 mg/Kg de peso, indicando la generación de daño hepático que pudo 
ser corroborado por el estudio histopatológico donde se muestra que los hígados 
de las ratas que recibieron solamente paracetamol fueron los que presentaron 
mayores signos de daño celular. Sin embargo, las enzimas séricas están cerca del 
valor normal en los grupos tratados con el extracto etanólico de Ence/ia canescens 
Lamarck; el extracto de 400 mg/Kg posee un efecto similar a la Silimarina a dosis de 
300 mg/Kg. En comparación con los otros estudios como de Arnao-Salas y col en el 
2012 (83¡ determinaron el efecto hepatoprotector del extracto acuoso de Yacón, no 
observaron efecto sobre el nivel de AST pero si de otras enzimas concluyendo que 
poseía un efecto hepatoprotector similar al Fármaco Silimarina. 
Sin embargo Troncoso y col en el 2007 (81l, evaluaron el efecto hepatoprotector del 
perejil midiendo las enzimas transaminasas y otras cuyos valores disminuyeron en 
comparación con el fármaco Purinor. 
Resumiendo los datos obtenidos hasta aquí, podemos decir que la intoxicación con 
paracetamol a la dosis de 250 mg/kg en ratas hembras, evidenciada por las 
actividades aumentadas de AST, ALT, FA y disminuidos de Proteínas totales y 
Albúmina fue atenuada por la administración de ECL. 
La eficacia del efecto hepatoprotector se le puede atribuir principalmente a la 
presencia de compuestos fenólicos entre ellos los fla\(onoides (106• 108• 109• uo¡ en 
80 
La eficacia del efecto hepatoprotector se le puede atribuir principalmente a la 
. d f '1" t 11 1 fl "d (106, 108, 109, 110) presencia e compuestos eno 1cos en re e os os avon01 es en 
sinergismo con otros metabolitos como esteroides, triterpenos y Antraquinonas. 
Por otra parte se ha demostrado la fuerte relación entre los fenoles y la actividad 
antioxidante !111' 112' 1131; los cuales podrían secuestrar los radicales libres generados 
durante el metabolismo del paracetamol. 
Estos estudios proporcionan una base científica para comprender uno de los 
posibles mecanismos de acción de Ence/ia canescens Lamarck "hierba lingo", en el 
uso de la medicina tradicional y abren el camino a futuras investigaciones. 
81 
CONCLUSIONES 
82 
1. Como resultado del screening fitoquímico realizado al extracto etanólico de 
Ence/ia canescens Lamarck "hierba lingo" hemos determinado la presencia de 
los siguientes grupos de metabolitos secundarios: flavonoides, aminoácidos, 
antraquinonas, triterpenos y esteroides. 
2. En la determinación de la toxicidad aguda a dosis limite, la dosis letal so se 
encuentra por encima de 2000 mg/kg, clasificándose el producto como no 
tóxico según la tabla de Williams publicada en el Manual de Técnicas de 
Investigación CYTED 1995 para productos naturales administrados por vía 
orogástrica en ratones. 
3. En la evaluación del efecto hepatoprotector, el extracto etanólico de Ence/ia 
canescens Lamarck a dosis de 400 mg/Kg fue el que presentó mayor actividad. 
4. Al comparar el efecto hepatoprotector del extracto etanólico de Ence/ia 
canescens Lamarck y de la Silimarina, se puede observar que la dosis de 400 
mg/Kg del extracto etanólico de Ence/ia canescens Lamarck posee un efecto 
similar en comparación con el fármaco de control. 
5. En los estudios histopatológicos se pudo corroborar las lesiones hepáticas que 
presentó el grupo tratado con APAP, mientras que estas lesiones están 
disminuidas en el grupo tratado con el extracto etanólico de Encelia canescens 
. Lamarck, lo cual se estaría evidenciando el gran efecto hepatoprotector de la 
planta. 
83 
RECOMEN DACIO N ES 
84 
Aislar y elucidar los· compuestos del extracto etanólico ECL "hierba lingo" 
para determinar los posibles metabolitos responsables pel efecto 
hepatoprotector. 
Realizar ensayos biológicos con extracto de flavonoides purificado para 
comprobar el efecto hepatoprotector. 
Determinar la actividad antioxidante con los compuestos fenólicos 
aislados. 
85 
REFERENCIAS 
BIBLIOGRÁFICAS 
86 
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galactosamine induced liver injury in rats.J.Nutr.1999 [citado 14 setiembre 
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http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10395599. 
2. . Amacher D. A toxicologist's guide to biomarkers of hepatic response. Hum Exp 
toxicol.2002; 21(5):253-62. 
3. Bozzo J. Implementación y desarrollo de una planta elaboradora de extracto 
de hierbas (Boldo y Rosa Mosqueta). Santiago de Chile; 2006. Pp. 21-29. 
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Resusc. 2012; 14(1):74-80. 
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Acetominophen-induced acute liver failure: results of a United States 
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100 
ANEXOS 
101 
Anexo N!! 01. Clasificación taxonómica de la planta 
r:·i~'~-~,,-·-·~~;--:A~~~(ie 'l"i!-Pr:iíii:ic!ÓndeiiJ;-jt1dusth'i. Rc.:i1ón~ble r'deié;;mp;:.;,¡;~ ctimiti¿<?:~· '< 
j,,, 
•• l;..ll. • .JEFA• P!~L H.ERSARlO SÁN MARt:OS (USM) DEL t'IÚSEO DE .HISTORlA NATURAL; DE 
Lt\ \.fN!VE:RS!OAD.NACIONAL r'IAYOR DE. SAN MARCOS, odA. CONSTANCIA QuE; · · 
")_,;-
La .tr>u~stra veg~tal (tallo, ·hoja y flor) reclbída de Deissv FERNANDEi. um·oA y· "'· 
Yás,Y.ina COCHACHI Al.FARO ha sido estudiada y clasificada como: EnceUa. 
éanescerfs tamardc y tiene. la siguiente posición taxonómica, .según el Sistema de 
Clas'ificac¡ón de Cror>qufst (1988). . . . . 
DI.V!Sl:ON: MAGNOI..IOPHVTA 
CLASf: MAGNOLIOPSIDA 
SUBCLASE:ASTERIDAE 
ORtiEN: ASTERAI..ES 
FAMILIA: ASTERACEAE 
GENERO:Encelia 
es~ecxe: Encelia cánescens Lainarck 
Nombre vulgar: ~hierba Hngo" . '· . 
· Detérminado por Mag: Hamílton ·.Bettr:án, 
Se ej.;tlende la· presenté coristanda .. a· sojiid:túcf 
cestudios '·' 
102 
.. 
Anexo Nº 02. Ubicación en los campos de Ence/ia canescens Lamarck. 
··,. 
' .. \. 
103 
ANEXO No 03. Obtención del extracto etanólico Encelia canescens Lamarck. 
M~ESTRA VEGETAL SECA 
n ( REFLUJO ) 
u 
( FILTRADO ) 
g 
( CONCENTRADO ) 
~ 
( EXTRACTO ) 
104 
ANEXO N!! 04. Experimento de toxicidad aguda. 
lOS 
ADMINISTRACIÓN DEL 
EXTRACTO A 2000 mg/Kg 
EVALUACIÓN DEL 
COMPORTAMIENTO 
Anexo N!! OS.Experimento de Efecto hepatoprotector. 
106 
RATAS 
ADMINISTRACIÓN DEL 
EXTRACTO Y APAP 
EXTRACCIÓN DE SANGRE 
POR PUNCIÓN CARDIACA 
OBTENCIÓN DE LA 
SANGRE 
Anexo N!! 06. Determinación de las distintas enzimas. 
CENTRIFUGAR LA MUESTRA 
107 
EXTRACCIÓN DEL 
SUERO 
MEZCLAR CON LOS 
REACTIVOS 
LECTURA DE LA 
MUESTRA 
RESULTADOS 
ANEXO No 07. Disección de las ratas. 
108 
ANEXO No OS.Muestras de hígados de Jos diferentes 'rupos tratados. 
EXTRACTO 
200 mg/Kg 
EXTRACTO 
400 mg/Kg [ SILIMARINA 
109 
ANEXO N° 9. Conservación de los hígados en formol al lO% para el estudio • 
110 
. ,.1,'j. :'"; .• :"" 
' ' ,;-~'> .' ,, 
.,'•, 
.< 
Anexo Nº 10. Cortes histopatológicos. 
APAP 250 mg/Kg 
lO X 
111 
GRUPO CONTROL 
Hígado normal. 40X 
Arquitectura hepática 
conservada. 
40X 
a. Presencia de esteatosis, 
Hígado graso. 
b. Degeneración vacuolar. 
Extracto de 200 mg/Kg 
Sinoides hepáticos dilatados. 
Extracto de 400 mg/Kg 
a. Zona portal normal 
b. Microesteatosis (20 %) 
112 
Silimarina 300 mg/Kg 
Microesteatosis. 
113 
,. •:' 
. · ... 
:,:·. :. ·.' ~- . : . 
. ,:,,-' 
: ~ _·, ,. '• 
..·._-' 
'-:- -· .. · 
·CONSTANCIA -_., .. 
~ . . . 
-·- _. 
·-·· 
Los Qliímic~s Farm?céuticos gue suscriben: 
· HAC:EN.CbNSTÁRQ.UE; , ·. 
··; -· 
' :' ._ - ·,· · .. ' .-.-... · . . 
Hari revisado él borrador de tesis "Toxicidad aguda y efecto hé.patopr~tector del·.·· 
. · extrácto etaríólico· de los· fal.los de. EnÚ!Iia·canescens Larharck.,en ratas en un modelo· 
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·presentación y para qt.ié previo tramite le ernita la resoh.Jdóri dé aprobación, 
lea 28 de noviembr{del 2014 
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